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检验科病原体检测流程

CATALOGUE

目录

01

样本采集与接收

02

样本处理与准备

03

检测方法选择

04

检测执行流程

05

结果分析与报告

06

质量控制与保证

01

样本采集与接收

采集方法规范

患者信息核对

采集前需核对患者身份信息与检测项目的一致性，避免样本混淆或信息错误导致检测结果偏差。

03

根据检测目的选择适宜的样本类型（如血液、痰液、尿液等），并明确采集部位、采集量及保存条件，确保样本质量符合检测要求。

02

样本类型适配

无菌操作原则

采集样本时必须严格遵循无菌操作规范，使用一次性无菌器械，避免交叉污染，确保样本的原始性和准确性。

01

样本运输要求

不同样本需在特定温度下运输（如冷藏、冷冻或常温），运输过程中需使用专用保温箱或冰袋，确保样本稳定性。

温度控制

运输容器必须符合生物安全标准，采用三层包装（内层防漏、中层吸水、外层防震），并标注生物危害标识，防止泄漏和污染。

生物安全包装

样本需在规定时间内送达实验室，延迟运输可能导致样本失效或病原体活性下降，影响检测结果可靠性。

时效性保障

接收时需检查样本容器是否破损、标签是否清晰、信息是否完整，对不合格样本需记录并联系重新采集。

样本完整性检查

通过实验室信息管理系统（LIS）录入样本编号、患者信息、检测项目等数据，确保信息可追溯且与后续流程无缝衔接。

信息录入系统

根据样本类型和检测需求进行初步分类（如离心、分装或固定），并标记紧急样本优先处理，提高检测效率。

分类与预处理

接收与登记流程

02

样本处理与准备

离心与分离步骤

根据不同样本类型（如血液、体液、组织）设定差异化的转速与时间，确保有效分离血浆、血清或细胞成分，同时避免细胞破裂导致杂质干扰。

样本离心参数优化

分层液选择与应用

低温离心控制

针对高密度病原体（如寄生虫卵）或低密度病毒颗粒，采用特定密度的分层液进行梯度离心，提高目标物富集效率并减少背景干扰。

对热不稳定样本（如RNA病毒载体）实施4℃预冷离心，维持生物分子完整性，防止降解影响后续检测灵敏度。

核酸提取技术

磁珠法高效提取

利用表面修饰硅基磁珠特异性吸附核酸，通过磁场分离实现自动化纯化，适用于高通量检测且交叉污染风险低，尤其适合新冠病毒等RNA病毒提取。

酚-氯仿有机萃取

传统方法用于难裂解病原体（如真菌、革兰阳性菌），通过相分离去除脂质与蛋白质，但需严格防护有害试剂并控制pH值以保证核酸得率。

柱式离心纯化技术

采用硅胶膜离心柱选择性结合核酸，经洗涤缓冲液去除非特异性蛋白后洗脱，操作稳定性强，适用于结核分枝杆菌等复杂样本的DNA提取。

预处理标准化

抗凝剂干扰消除

针对EDTA/肝素抗凝样本，添加螯合剂或肝素酶预处理，避免金属离子依赖性酶抑制或PCR扩增受阻，提升HBVDNA检测准确性。

内参基因添加

在提取前引入外源性内标（如MS2噬菌体RNA），全程监控提取效率并校正假阴性结果，确保寨卡病毒等低载量检测的可靠性。

样本灭活程序

采用56℃水浴或裂解缓冲液预处理使病原体失活，在保障生物安全性的同时保留核酸检测靶标，关键参数需通过验证试验确定。

03

检测方法选择

培养法应用要点

样本处理标准化

需严格遵循无菌操作规范，确保样本采集、运输及接种过程无污染，避免假阴性或假阳性结果。针对不同病原体（如细菌、真菌）选择特异性培养基（如血琼脂、沙保弱培养基），并优化培养条件（温度、气体环境）。

结果判读与验证

通过菌落形态、染色特性（革兰染色、抗酸染色）及生化反应（氧化酶试验、糖发酵试验）进行初步鉴定，必要时结合质谱技术（MALDI-TOFMS）提高准确性。

局限性控制

培养法耗时较长（通常需48-72小时），对苛养菌（如肺炎链球菌）或厌氧菌需特殊处理，且无法检测不可培养病原体（如病毒）。

实时荧光定量PCR（qPCR）可快速检测病原体核酸（如SARS-CoV-2、HBV），具备高灵敏度和特异性；多重PCR可同步筛查多种病原体（如呼吸道病毒panel），显著提升检测效率。

分子检测技术

PCR及其衍生技术

宏基因组测序（mNGS）适用于未知病原体鉴定或混合感染分析，能覆盖细菌、病毒、真菌及寄生虫全基因组，但需复杂生物信息学分析支持。

高通量测序应用

需严格防止核酸污染（如使用UNG酶防Carryover污染），并关注抑制剂（如血红蛋白、肝素）对扩增效率的影响。

质控与干扰因素

抗体检测策略

快速侧流免疫层析（如流感抗原检测）适用于床旁诊断，15分钟内出结果，但灵敏度低于核酸方法，需结合临床评估。

抗原检测优势

交叉反应处理

某些病原体抗原表位相似（如登革热与寨卡病毒），可能导致假阳性，需采用特异性单克隆抗体或WesternBlot验证。

ELISA或化学发光法检测IgM/IgG（如HIV、梅毒），用