普氏原羚个体识别分子技术规程.docxVIP

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ICS

FORMTEXT65.020.99

CCS

FORMTEXTB65

FORMTEXT63

FORMTEXT青海省地方标准

DBFORMTEXT63/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXT2025

FORMTEXT?????

FORMTEXT普氏原羚个体识别分子技术规程

FORMTEXT点击此处添加标准名称的英文译名

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FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT青海省市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DB63/TXXXX—2025

STYLEREF标准文件_文件编号DB63/TXXXX—2025

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前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由青海省林业和草原局提出并归口。

本文件起草单位：中国科学院西北高原生物研究所、青海省国家公园科研监测评估中心。

本文件主要起草人：蔡振媛、张同作、高红梅、宋晓英、丁旭洁、严琳、欧智布、胡天石、宋鹏飞、姚占山、江峰、顾海峰、李斌、梁程博、张萌、郭凡、陈晓苑、王佳能。

本文件由青海省林业和草原局监督实施。

普氏原羚个体识别分子技术规程

范围

本文件规定了普氏原羚个体识别分子技术的术语和定义、缩略语、主要仪器设备及试剂、溶液配方、操作程序、个体识别等技术要求。

本文件适用于普氏原羚个体识别技术。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T43650野生动物及其制品DNA物种鉴定技术规程

SF/T0134法医学生物检材核酸提取技术规范

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

脱氧核糖核酸样品

利用普氏原羚带毛囊的毛发、皮张、血液、肌肉等组织或新鲜粪便等样本提取的基因组DNA样品。

微卫星标记

普氏原羚的多个特定的基本重复单元为4碱基的微卫星序列，它的多态性可以用于普氏原羚个体识别，这些序列就叫微卫星标记。

微卫星基因分型

对DNA样品进行微卫星位点PCR扩增后，利用毛细管电泳技术测定生物样本基因型。

个体识别

采用微卫星标记技术，判断同一时间或不同时间，某一区域或多个区域的两个或多个DNA样品是否来源于同一个体。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

dNTPs：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosideTriphosphates）

DTT：二硫苏糖醇（Dithiothreitol）

EDTA：乙二胺四乙酸（EthylenediaminetetraaceticAcid）

OD：光密度（OpticalDensity）

PBS：磷酸盐缓冲溶液（PhosphateBufferedSaline）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

SDS：十二烷基磺酸钠（SodiumDodecylSulfonate）

Taq酶：耐热DNA聚合酶（Taq-DNAPolymerase）

TE：含乙二胺四乙酸的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris-EDTABufferSolution）

Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（Tris(hydroxymethyl)aminomethane）

主要仪器设备及试剂

主要仪器设备及试剂见附录A，除非另有说明，所用试剂均为分析纯。本文件所使用的超纯水和纯水应符合GB/T6682的要求。

溶液配方

见附录B。

操作程序

取样与储存

按照GB/T43650中的取样和储存相应要求，采集储存普氏原羚带毛囊的毛发、皮张、血液、肌肉、粪便等样本。

DNA样品提取与检测

根据检测样本类型，选择对应的商用试剂盒或按照SF/T0134的方法提取基因组DNA，严格防止样品间相互污染。使用微量分光光度计对每个DNA样品进行质量检测，OD260/OD280值在1.7～2.1之间，且浓度＞2.0?ng/μL的DNA样品判定为合格。

DNA样品保存

两周内使用的DNA样品