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2025年生物技术研究员《生物实验与分子生物学基础》备考题库及答案解析

单位所属部门：________姓名：________考场号：________考生号：________

一、选择题

1.在进行PCR实验时，以下哪个步骤是错误的（）

A.变性：将模板DNA加热至高温以分离双链

B.退火：降低温度使引物与模板DNA结合

C.延伸：在热稳定DNA聚合酶作用下合成新链

D.复性：升高温度使引物与模板DNA结合

答案：D

解析：PCR实验的三个基本步骤是变性、退火和延伸。变性步骤通过高温（通常95℃）使DNA双链分离；退火步骤降低温度（通常5565℃）使引物与模板DNA特异性结合；延伸步骤在热稳定DNA聚合酶（如Taq酶）作用下，以dNTP为原料合成新链。复性是指退火步骤，升高温度会导致引物与模板DNA解离，因此选项D描述错误。

2.下列哪种方法不适合用于观察细胞器的亚显微结构（）

A.透射电子显微镜

B.扫描电子显微镜

C.光学显微镜

D.超薄切片技术

答案：C

解析：细胞器的亚显微结构（如线粒体、内质网等）需要高分辨率成像技术才能观察。透射电子显微镜（TEM）和扫描电子显微镜（SEM）都能提供亚显微结构图像，超薄切片技术是制备生物样品进行电镜观察的前处理方法。光学显微镜（光镜）分辨率较低（约0.2微米），只能观察细胞器等较大结构，无法分辨亚细胞器级别的细节。

3.在琼脂糖凝胶电泳中，DNA片段的迁移速度主要取决于（）

A.DNA片段的浓度

B.琼脂糖的浓度

C.DNA片段的长度

D.电场方向

答案：C

解析：琼脂糖凝胶电泳中，DNA是带负电荷的，在电场作用下向正极迁移。迁移速度与凝胶浓度、DNA浓度、电场强度有关，但主要受DNA片段长度的影响——片段越长迁移越慢。电场方向决定迁移方向但不影响速度，凝胶浓度影响迁移阻力，片段浓度影响初始带电量和迁移效率，但长度是决定性因素。

4.下列哪个是DNA聚合酶的特性（）

A.需要RNA引物才能起始合成

B.可以从3端向5端延伸

C.具有核酸外切酶活性

D.在高温下保持活性

答案：D

解析：DNA聚合酶具有以下特性：①需要dNTP为原料；②只能从5端向3端延伸；③无核酸外切酶活性（仅具有5→3外切酶活性用于校正错误）；④热稳定，特别是一些来源于嗜热菌的DNA聚合酶（如Taq酶），能在高温（如95℃）下保持活性，这对PCR等高温酶促反应至关重要。选项A错误，DNA聚合酶不需要RNA引物，引物是由引物酶合成的；选项B错误，DNA合成方向是5→3；选项C错误，DNA聚合酶无核酸外切酶活性。

5.下列哪个实验可用于检测基因突变（）

A.凝胶过滤层析

B.DNA测序

C.琼脂糖凝胶电泳

D.限制性酶切分析

答案：B

解析：检测基因突变的常用方法包括：①DNA测序可以直接读取碱基序列，发现任何碱基替换、插入或缺失；②限制性酶切分析可以通过比较突变前后识别酶切位点变化；③点突变检测（如ASO法）可利用特异性探针。凝胶过滤层析主要用于分离分子大小不同的物质，琼脂糖凝胶电泳主要用于分离大小不同的核酸片段，均不能直接检测基因突变。DNA测序是最直接、最准确的方法。

6.在蛋白质纯化过程中，利用抗原抗体反应分离蛋白质的方法称为（）

A.亲和层析

B.离子交换层析

C.凝胶过滤层析

D.凝胶电泳

答案：A

解析：亲和层析是利用蛋白质与特定配体（如抗原与抗体、酶与底物）之间的高度特异性结合来分离纯化蛋白质的方法。离子交换层析基于蛋白质表面电荷与填料带电基团的相互作用；凝胶过滤层析基于分子大小筛分；凝胶电泳用于蛋白质鉴定和分离。抗原抗体反应是高度特异性的免疫结合，属于亲和层析原理。

7.下列哪个是PCR反应的引物（）

A.DNA聚合酶

B.DNA模板

C.dNTPs

D.特异性短链DNA

答案：D

解析：PCR反应需要三种基本成分：①DNA模板提供扩增模板；②DNA聚合酶催化合成新链；③dNTPs提供合成原料。引物是两条短的、与模板DNA互补的DNA或RNA链，分别位于待扩增区域的两侧，为DNA聚合酶提供起始合成的3OH末端。引物通常是特异性短链DNA（约1525bp）或RNA。

8.在WesternBlot实验中，第二抗体需要识别（）

A.DNA探针

B.RNA引物

C.蛋白质抗原

D.第一抗体

答案：D

解析：WesternBlot（蛋白质印迹）实验流程：①蛋白质通过SDSPAGE分离；②电转移至固相膜（PVDF或NC膜）；③用特异性一抗（识别目标蛋白）孵育；④用酶标二抗（识别一抗）孵育；⑤加入化学发光底物显色。因此，第二抗体是酶标抗体，需要识别结合在目标蛋白上的一抗。选项A、B是核酸杂交相关的，选项C是待检测的靶蛋白。

9.下列