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食品中4-氯双异丁酚丁的执法检验方法

1范围

本方法规定了食品中4-氯双异丁酚丁的高效液相色谱—串联质谱测定方法。

本方法适用于蜜饯、果冻、糖果、果蔬粉、饼干、代用茶、液体饮料、果酒和配制酒中4-氯双异丁酚丁的测定。

2原理

试样经甲醇提取，采用高效液相色谱—串联质谱仪检测，外标法定量。

3试剂和材料

除另有规定外，本方法中所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水。

3.1试剂

3.1.1甲醇(CH?OH):色谱级。

3.1.2甲酸(HCOOH):色谱级。

3.2试剂配制

3.2.150%甲醇溶液：量取甲醇(3.1.1)500mL,加水稀释至1000mL,混匀备用。

3.2.20.05%甲酸水溶液：量取甲酸(3.1.2)0.5mL,加水稀释至1000mL,混匀备用。

3.3标准品

4-氯双异丁酚丁[化学名称为(5-氯-2-氧代吲哚啉-3,3-二基)双(4,1-亚苯基)二异丁酸酯，又名4-氯双异丁酚汀]标准品，纯度≥94%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准品。标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式和相对分子量等信息见附录A。

3.4标准溶液配制

3.4.1标准储备液(1000mg/L):准确称取4-氯双异丁酚丁标准品适量(相当于有效成分10mg,精确至0.01mg),加甲醇(3.1.1)溶解，然后转移至10mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)定容至刻度，配制成质量浓度为1000mg/L的标准储备液。-18℃及以下避光贮存，有效期3个月。

3.4.2标准中间溶液(10.0mg/L):准确移取1000mg/L的标准储备液(3.4.1)0.50mL于50mL容量瓶中，用甲醇(3.1.1)稀释至刻度，摇匀，配制成标准中间溶液，质量浓度为10.0mg/L。0~4℃避光保存，有效期1个月。

3.4.3标准系列工作溶液：准确吸取标准中间溶液(3.4.2)适量，用50%甲醇溶液(3.2.1)配制成标准系列工作溶液，质量浓度为2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL,或依仪器响应情况配制适当浓度的标准工作液。若样品基质效应较强，可采用空白基质提取液配制适当浓度的基质标准系列工作溶液，临用现配。

3.5材料

3.5.1微孔滤膜：0.22μm,聚四氟乙烯滤膜。

4仪器和设备

4.1高效液相色谱—串联质谱仪，配电喷雾离子源(ESI)。

4.2天平：感量分别为0.01mg和1mg。

4.3超声波清洗器。

4.4恒温水浴锅。

4.5离心机：转速≥4000r/min。

4.6涡旋混合器。

5分析步骤

5.1试样制备和保存

取50g试样或所有试样(低于50g时),糖果(除胶质糖果)、果蔬粉、饼干、代用茶样品研磨或粉碎混匀，蜜饯取可食部分剪碎至2mm以下，胶质糖果加热融化后混匀，果冻样品充分搅碎至浆状，含二氧化碳的液体样品通过加热或超声去除二氧化碳。制备好的试样根据样品储存条件进行存储。

5.2样品前处理

称取1.0g(精确至0.001g)样品于25mL具塞刻度离心管中，加入20mL甲醇(3.1.1),超声提取10min(超声过程中摇匀2～3次),涡旋振荡10min,冷却至室温，用甲醇(3.1.1)稀释至刻度并摇匀。取5mL溶液经4000r/min离心5min,精确吸取1.0mL离心后上清液，用水稀释至2mL,涡旋混匀后用微孔滤膜(3.5.1)过滤，待高效液相色谱—串联质谱仪测定。

5.3仪器参考条件

5.3.1色谱条件

a)色谱柱：C18柱，100mm×2.1mm,1.8μm,或性能相当的色谱柱。

b)流动相：A为0.05%甲酸水溶液(3.2.2),B为甲醇(3.1.1),梯度洗脱程序见表1。

c)流速：0.3mL/min。

d)柱温：30℃。

e)进样量：5μL。

表1梯度洗脱程序表

梯度时间/min

流动相A/%

流动相B/%

0.0

90

10

0.5

90

10

1.5

30

70

3.5

5

95

8.0

5

95

8.1

90

10

10.0

90

10

5.3.2质谱参考条件

a)离子源：电喷雾离子源(ESI)。