植物钙依赖性蛋白激酶(CDPK)ELISA试剂盒说明书-赛拓森生物.pdfVIP

酶联免疫吸附测试EnzymeLinkedImmunosorbentAssay

植物钙依赖性蛋白激酶(CDPK)酶联免疫(ELISA)

试剂盒使用说明书

本试剂仅供研究使用，不得用于临床诊断规格：48T/96T

实验目的：

本试剂盒用于测定植物相关样本中钙依赖性蛋白激酶(CDPK)的含量。

实验原理：

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物钙依赖性蛋白激酶(CDPK)水平。用纯化的植物钙依赖

性蛋白激酶(CDPK)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入钙依赖性蛋白激酶

(CDPK)，再与HRP标记的钙依赖性蛋白激酶(CDPK)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过

彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。

颜色的深浅和样品中的钙依赖性蛋白激酶(CDPK)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD

值），通过标准曲线计算样品中植物钙依赖性蛋白激酶(CDPK)浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成48孔配置96孔配置保存

说明书1份1份

封板膜2片2片

密封袋1个1个

酶标包被板1×481×962-8℃保存

标准品：1000ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存

标准品稀释液1.5ml×1瓶1.5ml×1瓶2-8℃保存

酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存

浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存

注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：500、250、125、62.5、31.25ng/L.

样本处理及要求：

1、对于样本要求保持鲜重

2、称取样本中的重量不小于50mg，一般以1g为基准,但不严格要求固定样本每个重量必须达到相同

的水平。

3、匀浆的比例选取10%，相当于1g组织加9ml的匀浆液来进行匀浆。

4、匀浆液选取PBS（PH7.2-7.4，浓度为0.01mol/L）

5、匀浆过程选用组织匀浆器，冰浴上匀浆。(或者进行液氮碾磨)离心取上清，离心转速选用5000转

每分，时间是15分钟。取上清液待检！

需自备的仪器耗材：

1.酶标仪（450nm）

2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒温箱

4.蒸馏水或去离子水

操作步骤：

1、加样：标准品设定5个浓度点10个孔，每个浓度设定平行孔，加入50μl不同浓度的标准品，空

白孔设定1个孔加入50μl蒸馏水（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样

品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀

释度为5倍）。加样将样品加