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T7表达系统转录调控的机理化学诱导型噬菌体DE3是l噬菌体的衍生株，一段含有lacI、lacUV5启动子和T7RNA聚合酶基因的DNA片段被插入其int基因中用噬菌体DE3的溶源菌作为表达载体的宿主菌，调控方式为化学诱导型，类似于Lac表达系统。T7RNA聚合酶基因lac启动子E.Coli（DE3）T7启动子目的基因T7RNA聚合酶IPTG诱导第29页，共79页，星期日，2025年，2月5日T7表达系统转录调控的机理温度诱导型PL启动子控制T7RNA聚合酶基因，通过热诱导方式激发T7噬菌体启动子的转录。这种方式可以使本底转录降到很低的水平，尤其适用于表达对大肠杆菌宿主有毒性的重组蛋白质。T7RNA聚合酶基因PL启动子E.Coli（CE6）T7启动子目的基因T7RNA聚合酶热诱导cI857第30页，共79页，星期日，2025年，2月5日T7表达系统转录调控的机理双质粒系统一个质粒带有T7RNA聚合酶基因，另一个质粒带有T7启动子和目的基因两个质粒的复制子和抗性标记不能相同调控方式为控制T7RNA聚合酶的启动子调控类型T7RNA聚合酶热诱导T7启动子目的基因T7RNA聚合酶基因PL启动子cI857p15AoriKanRColE1oriAmpR第31页，共79页，星期日，2025年，2月5日3.2TheTerminator??StopsRNAsynthesisatspecificpointsalongtheDNAtemplate??TheenzymestopspolymerisingnucleotidesintoRNA,releasestheRNAchainandleavestheDNAtoeventuallyreinitiateatanotherpromoter.??Features:AdyadsymmetryintheDNA,centered15to20nucleotidesbeforetheendoftheRNAthisleadstoatranscriptthatcanformanhairpinloopRunofaboutsixAsintheDNAtemplatewhicharetranscribedintoUsattheendoftheRNA第32页，共79页，星期日，2025年，2月5日Howcouldthesetwostructural
featurescausetermination?第33页，共79页，星期日，2025年，2月5日强化转录终止的必要性外源基因在强启动子的控制下表达，容易发生转录过头现象，即RNA聚合酶滑过终止子结构继续转录质粒上邻近的DNA序列，形成长短不一的mRNA混合物。过长转录物的产生在很大程度上会影响外源基因的表达，其原因如下：转录产物越长，RNA聚合酶转录一分子mRNA所需的时间就相应增加，外源基因本身的转录效率下降；如果外源基因下游紧接有载体上的其它重要基因或DNA功能区域，如选择性标记基因和复制子结构等，则RNA聚合酶在此处的转录可能干扰质粒的复制及其它生物功能，甚至导致重组质粒的不稳定性；过长的mRNA往往会产生大量无用的蛋白质，增加工程菌无谓的能量消耗
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