单底物酶促反应.pptVIP

第1页，共31页，星期日，2025年，2月5日第一节动力学方程推导酶反应的基本动力学关系，是指酶反应速度与酶和底物间的动力学关系。因为酶和底物是构成酶反应系统最基本的因素，它们决定酶反应的基本性质、酶反应的速度规律，而其他各种因素也正是通过它们产生影响的；而且，这种动力学关系是整个酶反应动力学的基础。描写这种基本动力学关系的是米氏方程(Michaelis-Mentenequation)。v=vmax[S]/(Km+[S])第2页，共31页，星期日，2025年，2月5日酶促反应速度的测定与酶的活力单位1、测定酶促反应的速度必需测初速度2、酶活力3、酶活力的表示方法4、酶活力测定方法：终点法动力学法检测酶含量及存在，很难直接用酶的“量”（质量、体积、浓度）来表示，而常用酶催化某一特定反应的能力来表示酶量，即用酶的活力表示。酶催化一定化学反应的能力称酶活力，酶活力通常以最适条件下酶所催化的化学反应的速度来确定。第3页，共31页，星期日，2025年，2月5日酶活力测定方法终点法:酶反应进行到一定时间后终止其反应，再用化学或物理方法测定产物或反应物量的变化。动力学法:连续测定反应过程中产物\底物或辅酶的变化量，直接测定出酶反应的初速度。第4页，共31页，星期日，2025年，2月5日酶活力的表示方法活力单位（activeunit）习惯单位（U）:底物(或产物)变化量/单位时间国际单位（IU）:1μmoL变化量/分钟Katal（Kat）：1moL变化量/秒比活力=总活力单位总蛋白mg数=U(或IU)mg蛋白量度酶催化能力大小转换系数（Kcat）底物（μmoL）/秒·每个酶分子量度酶纯度比活力（specificactivity）量度转换效率第5页，共31页，星期日，2025年，2月5日各种因素对酶反应速度的影响2、底物浓度3、pH（最适pH的概念）4、温度（最适温度的概念）5、激活剂6、抑制剂1、酶浓度当S足够过量，其它条件固定且无不利因素时，v=k[E]第6页，共31页，星期日，2025年，2月5日底物浓度对酶反应速度的影响?酶反应速度与底物浓度的关系曲线（Michaelis—Menten曲线）?米氏方程的提出及推导?米氏常数的意义?米氏常数的测定第7页，共31页，星期日，2025年，2月5日单分子酶促反应的米氏方程及Km推导原则：从酶被底物饱和的现象出发，按照“稳态平衡”假说的设想进行推导。米氏方程:米氏常数:第8页，共31页，星期日，2025年，2月5日酶反应速度与底物浓度的关系曲线第9页，共31页，星期日，2025年，2月5日米氏方程的推导令：将（4）代入（3），则：[ES]生成速度：，[ES]分解速度：即：则：(1)经整理得：由于酶促反应速度由[ES]决定，即，所以(2)将（2）代入（1）得：(3)当酶反应体系处于恒态时：当[Et]=[ES]时，(4)所以第10页，共31页，星期日，2025年，2月5日第二节米氏方程的讨论一、米氏方程的特性二、米氏方程中v和[S]的关系当v＝Vmax时，v与[S]无关，只和[E0]成正比，这时表明酶的活性部分已全部被底物占据。当v＝0.5Vmax时，表示活性部位有一半被占据。当一个酶的Km已知，则任何底物浓度下酶活性部位被占据的分数：Ys=vVmax=[S]Km+[S]称为该酶促反应的相对速度。第11页，共31页，星期日，2025年，2月5日米氏方程所作曲线的曲度，不随Km和Vmax的变化而变化。所以任何酶只要服从米氏方程。则到达任何两个Vmax分数的对应底物浓度之比为一常数。例如：∴[S]0.9=9Km，同理[S]0.1=1/9Km，所以：[S]0.9/[S]0.1＝9Km/1/9Km＝81，即达90％Vmax与达10％Vmax所需底物浓度之比总是81。同样也可得到达70％Vmax与达10％Vmax所需底物浓度之比总是21。在酶促反应初速度区即在一级速度区，由于[S]Km，∴v=Vmax[S]/Km=k[S]。从这个方程可知，一级速度常数k=Vmax/Km。0.9VmaxVmax=[S]0.9Km+[S]0.9第