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《细胞工程学》考试及答案复习题库及答案

一、名词解释（每题3分，共30分）

1.细胞全能性：指单个细胞在一定条件下能够发育成完整生物体或分化为各种细胞类型的潜能，其分子基础是细胞含有该物种完整的基因组。

2.原代培养：直接从生物体组织中取出细胞进行的首次培养，细胞保持原组织的生物学特性，分裂次数有限（一般不超过10代）。

3.单克隆抗体：由单一B淋巴细胞克隆产生的、针对同一抗原表位的高度均一抗体，通过杂交瘤技术获得，具有特异性强、纯度高的特点。

4.核移植技术：将供体细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞中，通过重构胚的激活与发育，获得与供体核遗传物质一致的个体或细胞的技术，分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植。

5.植物原生质体融合：通过酶解法去除植物细胞壁获得原生质体，再利用化学（PEG）或物理（电融合）方法诱导不同来源原生质体融合，形成杂种细胞的技术。

6.干细胞：一类具有自我更新能力和多向分化潜能的未分化或低分化细胞，可分为胚胎干细胞（ES细胞）和成体干细胞（如间充质干细胞）。

7.细胞系：原代培养细胞经传代后，部分细胞克服接触抑制或衰老限制，获得无限增殖能力形成的细胞群体，可能发生基因型或表型改变。

8.人工种子：将植物组织培养产生的胚状体、不定芽等包埋在含有营养和保护物质的人工种皮中，形成的类似天然种子的结构，可用于快速繁殖和种质保存。

9.CRISPR-Cas9系统：一种由RNA引导的基因组编辑技术，利用Cas9核酸酶在特定靶序列处切割DNA，通过非同源末端连接（NHEJ）或同源重组（HDR）实现基因敲除、插入或定点突变。

10.iPS细胞（诱导多能干细胞）：通过导入特定转录因子（如Oct4、Sox2、Klf4、c-Myc）将成体细胞重编程为具有胚胎干细胞特性的多能干细胞，可分化为多种组织细胞。

二、简答题（每题6分，共30分）

1.简述动物细胞培养的基本步骤及关键注意事项

答：基本步骤：（1）组织取材与消化：取动物组织（如胚胎或幼龄组织），用胰蛋白酶或胶原酶消化分散为单细胞悬液；（2）原代培养：将细胞接种于含血清的培养基（如DMEM）中，置于37℃、5%CO?培养箱中培养；（3）传代培养：当细胞密度达80%-90%时，用胰酶消化后分瓶继续培养。

关键注意事项：①严格无菌操作，防止细菌、支原体污染；②控制消化时间，避免过度消化导致细胞死亡；③培养基需补充血清（提供生长因子）或无血清培养基（减少批次差异）；④定期检测细胞活力（如台盼蓝染色）和核型（防止转化）。

2.植物组织培养中常用的培养基组成及各成分的作用

答：常用培养基（如MS培养基）组成及作用：（1）无机营养：大量元素（N、P、K等）和微量元素（Fe、Mn、Zn等），是细胞结构和代谢的基础；（2）有机营养：蔗糖（碳源和渗透压调节）、维生素（如B族维生素，辅酶成分）、氨基酸（如甘氨酸，蛋白质合成前体）；（3）植物生长调节剂：生长素（如IAA、2,4-D，促进细胞分裂和根分化）和细胞分裂素（如6-BA、KT，促进芽分化），二者比例决定愈伤组织分化方向；（4）凝固剂（如琼脂）：用于固体培养基，提供支撑。

3.单克隆抗体制备的关键步骤及杂交瘤细胞筛选的原理

答：关键步骤：（1）免疫小鼠：用目标抗原免疫BALB/c小鼠，激活B淋巴细胞；（2）细胞融合：取免疫小鼠脾细胞（含抗原特异性B细胞）与骨髓瘤细胞（无限增殖能力），用PEG或电融合法诱导融合；（3）筛选杂交瘤细胞：将融合细胞接种于HAT培养基（含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶），未融合的骨髓瘤细胞因缺乏HGPRT（次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶）无法利用补救合成途径而死亡，未融合的B细胞因不能无限增殖而死亡，仅杂交瘤细胞存活；（4）克隆化培养与检测：通过有限稀释法筛选分泌目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。

4.简述胚胎干细胞（ES细胞）与诱导多能干细胞（iPS细胞）的异同

答：相同点：均具有自我更新能力和多向分化潜能（可分化为三胚层细胞）；表达多能性标记（如Oct4、Sox2）；体外可形成拟胚体。

不同点：（1）来源：ES细胞来自早期胚胎（囊胚内细胞团），iPS细胞来自成体细胞重编程；（2）伦理争议：ES细胞涉及胚胎破坏，伦理限制大；iPS细胞避免伦理问题；（3）表观遗传：ES细胞表观遗传状态更接近自然胚胎，iPS细胞可能存在残留的供体细胞表观记忆；（4）应用限制：ES细胞移植可能引发免疫排斥，iPS细胞（自体来源）可减少排斥反应。

5.植物原生质体分离与融合的技术要点

答：分离要点：（1）材料选择：幼嫩组织（如叶片、子叶），细胞活跃易酶解；（2）酶解条件：用纤维素酶（分解纤维素）和果胶酶（分解果胶质）混合酶液