多重核酸分子检测有证参考物质、人类基因组参考物质示例.pdfVIP

GB/T44586.2—XXXX/ISO21474-2:2022

附录A

（规范性）

有证参考物质

A.1核酸有证参考物质的使用

A.1.1通则

关于有证参考物质（CRM）和参考物质（RM）使用的更详细说明，可参阅ISO指南33[10]。

A.1.2检验的验证和测量不确定度

偏倚（测量值与真值之间的差异）的估计是检验验证中最困难的环节之一，但合适的参考物质可在

其认定值不确定度与被验证检测方法不确定度的范围内提供有价值信息。虽然可溯源的认定值最为理

想，但通过使用认证规范程度较低的参考物质，仍可建立两种或多种检测方法间的偏倚差异评估。显然，

参考物质需在基质类型、分析物浓度等参数方面符合检测范围要求。理想情况下，建议使用一系列覆盖

完整检测范围的参考物质进行检测。当评估成熟检测方法的微小修改时，可采用较为简化的偏倚研究方

案。

通过对覆盖被确认检验方法允许变量全范围的参考物质进行重复测量，可估算通常需校正的偏倚

相关不确定度。

参考物质相关不确定度需控制在不超过样品测量不确定度的三分之一。

A.1.3校准

通常采用纯物质参考物质对检验的测量阶段进行校准。当然，其他检测环节（如样品消解、分离和

衍生化等）不在此列，而分析物损失、污染及干扰等问题及其相关不确定度，将作为检验验证的组成部

分予以处理。参考物质纯度的相关不确定度将计入测量总不确定度。例如，认证纯度为99.9%的参考物

质，其扩展不确定度扩展不确定度U（k=2）为0.1%，对整体测量不确定度（MU）分量的贡献值为0.1%。

对于痕量物质分析而言，此量级的不确定度通常影响甚微，但在定量分析工作中则可能具有显著影

响。

某些基于光谱分析的检测方法（如X射线荧光分析），需采用基质参考物质对整个分析过程进行校

准。除基质需高度匹配外，样品和参考物质中的分析物形态应保持一致，且参考物质的分析物浓度范围

应设计为覆盖样品的浓度区间。

[10][13]

ISO指南33及参考文献提供了更多实用信息。

A.1.4质量控制(QC)和质量保证（QA）

对于内部质量控制，可适当放宽对特性量值认证的要求，但必须确保参考物质具有充分的均匀性和

稳定性。该要求亦适用于评估不同实验室间测量结果一致性的样品。在能力验证中，样品均匀性至关重

要，且必须评估并控制样品在验证活动周期内的稳定性。尽管对能力验证样品进行特性量值认证具有显

著优势，但其成本往往使其难以实施，故常采用实验室间共识均值作为替代方案。因此，能力验证方案

中所用指定值的可靠性常存疑虑。这是因为即便一组数据的共识均值具有明确数值，但多数未必正确，

故其本质上带有未明示的不确定度成分。因此，对能力验证数据的解读需持审慎态度。符合ISO17043

[12]要求的能力验证机构在结果处理时会充分考量不确定度。

A.2参考物质适用性评估

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如前所述，关键质量参数是与认定值关联的不确定度及其估计值的可靠性。不确定度预估按以下方

式计算：“认证”数据将标注扩展不确定度U，采用包含因子k=2，对应约95%置信水平。

然而，通常无法获得完整的不确定度数据，故需考虑其他质量准则。此外，非专业人士可能无法全

面评估“认证”数据，因此建议采用质量核查清单或第三方质量认可体系。此类体系目前正在开发中，但

需以时日才能完全建立。

A.3证书和支持性报告

理想情况下，应提供符合ISO指南31[13]的证书，以及包含性能、认证及统计分析流程的报告（符合

ISO指南35[14]）。然而，许多参考物质（特别是早期生产及非专用参考物质）无法完全符合ISO指南31和

35的要求。任何能提供符合要求的可信证据的替代性等效信息均可被接受，例如，技术报告、商品说明

书、期刊论文或科学会议报告以及与供应商的往来信函等。