第二节基因工程的基本操作步骤.ppt

第1页，共23页，星期日，2025年，2月5日获得目的基因形成重组DNA分子将重组DNA分子导入受体细胞筛选含有目的基因的受体细胞目的基因的表达基因工程基本操作步骤第2页，共23页，星期日，2025年，2月5日一、获得目的基因1、目的基因较小且序列已知——用化学方法直接人工合成。2、目的基因的全部或部分序列已知——用聚合酶链式反应（简称PCR）技术扩增3、目的基因的序列是未知的——从基因文库中获取目的基因第3页，共23页，星期日，2025年，2月5日②用某种限制酶切成多个片段①提取某种生物的DNA第一步：建立基因文库（一般已做好）③将片段与载体连接起来④导入受体菌（常用大肠杆菌）群体中基因文库第二步：从基因文库中获取目的基因⑤根据目的基因的产物等特性，用原限制酶将目的基因切下。第4页，共23页，星期日，2025年，2月5日①用与切下目的基因的同种限制酶切开载体DNA二、形成重组DNA分子②用DNA连接酶连接目的基因和载体DNA，形成重组DNA分子。（重组质粒或重组病毒）第5页，共23页，星期日，2025年，2月5日三、将重组DNA分子导入受体细胞第6页，共23页，星期日，2025年，2月5日构建重组质粒第7页，共23页，星期日，2025年，2月5日四、筛选含有目的基因的受体细胞在含有四环素的选择培养基上培养目的基因抗四环素基因导入只有含重组DNA分子的细胞能生长抗四环素基因抗氨苄青霉素基因与目的基因两侧相同的酶切位点含目的基因第8页，共23页，星期日，2025年，2月5日含四环素的培养基含氨苄青霉素的培养基含目的基因第9页，共23页，星期日，2025年，2月5日五、目的基因的表达受体细胞是原核细胞时，目的基因可留在质粒上；受体细胞是真核细胞时，目的基因必须插入染色体DNA。第10页，共23页，星期日，2025年，2月5日①检测目的基因是否插入了受体细胞染色体DNA中——DNA分子杂交技术将DNA固定在膜上，加热解旋将带有放射性同位素标记的含目的基因的DNA片段（探针，一般为单链）加到膜上提取受体细胞基因组DNA一段时间后冲洗检测膜上是否有杂交带（放射性）第11页，共23页，星期日，2025年，2月5日第12页，共23页，星期日，2025年，2月5日②检测目的基因是否转录——分子杂交技术固定在膜上的变成mRNA，探针与①相同③检测目的基因是否翻译成蛋白质——抗原-抗体杂交④检测生物个体是否出现相应性状第13页，共23页，星期日，2025年，2月5日活动：完成“基因工程操作程序的模拟操作”思考：基因工程的理论基础是什么？第14页，共23页，星期日，2025年，2月5日原核生物界原生生物界植物界动物界真菌界第15页，共23页，星期日，2025年，2月5日DNA的结构和功能第16页，共23页，星期日，2025年，2月5日转录翻译遗传信息的表达机制相同第17页，共23页，星期日，2025年，2月5日整个生物界共用一套密码子第18页，共23页，星期日，2025年，2月5日当想一想，为什么同种？