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病理科病理切片质量控制教程

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目录

01

标本接收与处理

02

制片标准化流程

03

染色技术规范

04

质量控制关键节点

05

常见问题与改进

06

质量保障体系

01

标本接收与处理

标本验收标准规范

接收标本时需核对患者信息、标本类型及数量是否与申请单一致，确保标签清晰无破损，防止信息混淆或丢失。

完整性检查

标本状态评估

特殊标本处理要求

检查标本是否出现干涸、腐败或过度挤压等异常情况，若发现不合格标本需立即记录并联系临床科室重新采集。

针对活检、手术切除等不同标本类型，明确区分验收标准，如活检标本需标注取材部位，大标本需测量体积并描述形态特征。

推荐使用浓度为10%的中性缓冲福尔马林作为常规固定液，其渗透性强且能有效保存组织形态与抗原性。

中性缓冲福尔马林应用

小标本（如穿刺活检）需固定6-12小时，大标本需延长至24-48小时，避免固定不足导致组织软化或过度固定引起硬化。

固定时间优化

对富含脂肪或钙化组织需调整固定液配比或延长固定时间，并确保完全浸没标本以避免固定不均。

特殊组织固定要求

固定液选择与时间控制

梯度酒精脱水程序

脱水后需经二甲苯透明处理，时间控制在1-2小时内，随后浸蜡温度保持在60-65℃，分两次浸蜡以确保石蜡充分渗透。

透明剂与浸蜡控制

自动化设备校准

定期验证脱水机各试剂浓度及时间参数，记录更换试剂批次，避免因试剂失效导致组织脱水不全或收缩变形。

依次采用70%、80%、95%及无水乙醇进行脱水，每级停留时间根据组织类型调整（如软组织1小时，致密组织2小时）。

脱水流程标准化参数

02

制片标准化流程

组织包埋方向与温度控制

01.

包埋方向标准化

确保组织样本在包埋盒中的方向一致，便于后续切片时获得完整的组织切面，避免因方向错误导致关键病变区域缺失。

02.

石蜡温度精确调控

包埋石蜡的温度需严格控制在特定范围内，过高会导致组织收缩变形，过低则影响石蜡渗透性，从而降低切片质量。

03.

冷台预冷时间控制

包埋后的组织块需在冷台上预冷足够时间，以确保石蜡充分凝固，避免切片时出现组织撕裂或分层现象。

切片厚度与完整性标准

02

03

防卷曲与防皱褶技术

01

厚度一致性要求

切片时需使用防卷板或辅助工具，确保切片平整无卷曲，摊片过程中避免人为皱褶影响后续染色效果。

完整性检查标准

每张切片需完整包含目标组织区域，边缘整齐无缺损，关键病变部位不得因切片操作而丢失或损伤。

常规病理切片厚度应严格控制在特定微米范围内，过厚会影响显微镜下观察的清晰度，过薄则可能导致组织断裂或折叠。

水温与摊片技巧

烤片温度需分阶段控制，初始低温烘烤去除水分，后续逐步升温固定组织，避免高温导致抗原丢失或组织龟裂。

烤片温度与时间优化

玻片预处理要求

载玻片需预先涂覆粘附剂（如多聚赖氨酸），以增强组织粘附性，防止染色过程中组织脱落影响诊断准确性。

摊片水浴温度需恒定，水温过高可能导致组织膨胀变形，过低则影响切片展开；摊片时需用细针轻柔引导组织至载玻片中央。

摊片与烤片操作要点

03

染色技术规范

苏木精染色时间与浓度

染色液浓度标准化

苏木精染液需严格按配方配制，浓度过高易导致细胞核过染，浓度不足则染色浅淡，建议使用经过验证的商业化试剂或实验室标准化配制流程。

动态时间调控

染色时间需根据组织类型和固定条件调整，常规石蜡切片建议染色5-10分钟，冰冻切片可缩短至2-3分钟，需结合显微镜观察核质对比度实时优化。

氧化与成熟控制

新配苏木精需充分氧化至成熟状态，可通过定期检测染液pH值和氧化程度（如加入氧化汞或碘酸钠），未成熟染液易导致染色不均或褪色。

盐酸分化精准控制

分化液盐酸浓度通常为0.5%-1%，分化时间控制在数秒至数十秒，需在显微镜下观察至细胞核与背景对比清晰，过度分化会导致核染色丢失。

返蓝液选择与作用

流水返蓝需持续冲洗10-15分钟，或使用弱碱性溶液（如氨水、Scott液）加速返蓝过程，确保细胞核恢复蓝色且背景干净。

温度与水质影响

分化返蓝过程需控制水温在15-25℃，避免高温加速反应；去离子水可减少矿物质沉积导致的背景污染。

分化返蓝操作关键点

伊红染色梯度控制

02

酒精脱水梯度匹配

伊红染色后需经70%-95%梯度酒精脱水，低浓度酒精保留染色强度，高浓度酒精去除多余染料，梯度跳跃过大会导致染色不均或脱色。

染色时间与pH调控

酸性环境（pH4-5）可增强伊红特异性结合，染色时间通常为30秒-2分钟，过度延长会导致胞质过染并影响核质对比度。

01

染色浓度梯度优化

伊红染液浓度通常为0.5%-1%，低浓度适用于细胞丰富组织（如淋巴结），高浓度适用于纤维成分多的组织（如子宫肌瘤），需通过预实验确定最佳浓度。

04

质量控制关键节点

切片厚度定期检测方法