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葡萄苦腐病菌检疫鉴定方法标准立项报告

EnglishTitle:StandardizationProjectReportonQuarantineandIdentificationMethodsfor*Greeneriauvicola*(GrapeBitterRotPathogen)

摘要

葡萄是世界四大水果之一，具有重要的经济价值，我国葡萄产业近年来发展迅速，已成为促进地方经济发展和农民增收的重要产业。葡萄苦腐病是由病原菌*Greeneriauvicola*引起的一种严重果实腐烂病害，在美国、澳大利亚、新西兰等多个国家广泛分布，我国江西等地亦有局部发生报道。该病害可侵染葡萄的根茎、枝叶、花序及果实，造成产量损失高达30%-50%，严重影响鲜食和酿酒葡萄的品质与经济效益。鉴于其危害性，我国已于2007年将葡萄苦腐病菌列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》。然而，目前国内尚未发布相关国家标准，导致检疫工作中缺乏统一、科学的技术支撑。本报告旨在阐述制定《葡萄苦腐病菌检疫鉴定方法》标准的目的意义、适用范围及主要技术内容。通过形态学观察、生物学培养和实时荧光PCR等分子生物学技术相结合，建立一套高效、准确的检疫鉴定体系，为我国植物检疫工作提供技术依据，防范外来有害生物入侵，保障葡萄产业健康发展。

关键词：葡萄苦腐病；*Greeneriauvicola*；检疫鉴定；实时荧光PCR；植物病害防控

Keywords:Grapebitterrot;*Greeneriauvicola*;Quarantineidentification;Real-timePCR;Plantdiseasecontrol

正文

一、目的与意义

葡萄作为世界四大水果之一，具有适应性强、结果早、经济效益高等特点。近年来，我国葡萄产业迅速发展，全国34个省（市、自治区），包括台湾省，均有种植。葡萄栽培及其加工产业已成为推动地方经济发展、增加农民收入的重要途径。然而，葡萄苦腐病（Grapebitterrot）作为美国和澳大利亚等国重要的果实腐烂病害，对全球葡萄生产构成严重威胁。该病害可侵染大多数葡萄栽培种和野生种，目前已在美国、乌拉圭、澳大利亚、新西兰、巴西、南非、希腊、意大利、印度、日本及中国台湾等地区分布，我国江西省亦有局部发生报道。

葡萄苦腐病菌*Greeneriauvicola*可侵染葡萄的根茎、枝叶、花序及果实，对鲜食和酿酒葡萄均造成严重影响，导致产量降低、品质下降。具体症状表现为：根茎部出现变色坏死斑；枝蔓基部表皮颜色变浅，严重时顶梢枯死；叶片叶柄出现浅褐色、边缘模糊的病斑，可环绕整个叶片；新梢和嫩叶上产生黑褐色小点，后期形成分生孢子盘；果实发病时，病菌多从果梗侵入，果蒂处出现白色斑痕，逐渐蔓延至果粒，导致软腐，并在果实表面形成环纹状排列的分生孢子盘。感病浆果在数日内变软、脱落，味道极苦，故称“苦腐病”。据研究，该病害在美国北卡罗来纳州造成产量损失达30%，严重发生地区甚至高达50%。

鉴于其严重危害性，我国农业部于2007年发布第862号公告，将葡萄苦腐病菌列入《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》，以防止其传入和扩散。然而，目前我国尚未发布相关国家标准，导致检疫鉴定工作缺乏统一、科学的技术依据。宁波海关曾在全国首次截获该病菌，并积累了相关菌株资源，为标准的制定提供了实践基础。本标准拟采用形态学与分子生物学相结合的方法，建立一套高效、准确的检疫鉴定技术体系，为我国植物检疫工作提供技术支撑，防范外来有害生物入侵，保障葡萄产业安全与可持续发展。

二、范围与主要技术内容

本标准适用于所有可能携带葡萄苦腐病菌的植物及其产品中该病原菌的检疫鉴定。主要技术内容包括以下几个方面：

1.病害症状观察与生物学特征研究

通过人工接种实验，系统观察并记录葡萄苦腐病在不同寄主部位（如果实、枝叶、根茎等）的症状特征，明确其病害发展规律和形态学识别要点。

2.病原菌分离与培养

采用组织分离法对病原菌进行纯化培养，观察其菌落形态、生长特性及产孢结构等生物学特征，为形态学鉴定提供依据。

3.分子生物学鉴定方法开发

通过分析葡萄苦腐病菌及其近似种的基因序列（如ITS、TUB2等），设计特异性引物和探针，建立实时荧光PCR检测方法。对该方法的特异性、灵敏度和重复性进行系统验证，确保其在实际检疫工作中的准确性与可靠性。

4.综合鉴定体系的建立

最终以病害症状、病原形态特征及实时荧光PCR检测结果作为鉴定依据，形成一套多技术融合的检疫鉴定流程，提高检测效率与准确性，为我国口岸检疫和田间监测提供标准化技术支撑。

介绍修订的企事业单位或标委会

宁波海关作为本标准制定的主要参与单位，在植物检疫领域具有丰富的实践