DB35-T 896-2009 食品中碱性桃红T含量的测定 液相色谱-荧光检测法.docxVIP

DB35T8962009食品中碱性桃红T含量的测定液相色谱荧光检测法

1范围

本标准规定了食品中碱性桃红T含量的液相色谱荧光检测方法。

本标准适用于糖果、蜜饯、果酱、饮料、调味品等食品中碱性桃红T含量的测定。

本方法的检出限为0.05mg/kg，定量限为0.15mg/kg。

2原理

试样中的碱性桃红T经甲醇水溶液提取，固相萃取柱净化后，采用液相色谱分离，荧光检测器检测，外标法定量。

碱性桃红T在酸性条件下形成阳离子，经C18色谱柱分离，在激发波长540nm、发射波长580nm条件下产生特征荧光，根据保留时间和荧光强度进行定性和定量分析。

3试剂和材料

除非另有说明，本标准所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

3.1甲醇：色谱纯。

3.2乙腈：色谱纯。

3.3甲酸：色谱纯。

3.4乙酸铵：色谱纯。

3.5碱性桃红T标准品：纯度≥98%。

3.6碱性桃红T标准储备溶液：准确称取碱性桃红T标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至100mL，配制成100μg/mL的标准储备溶液，于4℃避光保存，有效期3个月。

3.7碱性桃红T标准工作溶液：吸取适量标准储备溶液，用甲醇水（1:1，v/v）逐级稀释成0.01μg/mL、0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的标准工作溶液，现用现配。

3.8提取液：甲醇水（7:3，v/v）。

3.9净化洗脱液：甲醇水（8:2，v/v）。

3.100.1%甲酸水溶液：取1.0mL甲酸，用水定容至1000mL。

3.115mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵，用水溶解并定容至1000mL。

3.12固相萃取柱：C18柱，500mg/6mL，或相当者。

3.13微孔滤膜：0.22μm，有机相。

4仪器和设备

4.1液相色谱仪：配备荧光检测器。

4.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。

4.3超声波清洗器：功率250W，频率40kHz。

4.4离心机：转速≥4000r/min。

4.5旋转蒸发仪。

4.6氮吹仪。

4.7固相萃取装置。

4.8涡旋混合器。

4.9pH计：精度±0.02。

4.10组织匀浆机。

4.11色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相当者。

5试样制备与保存

5.1固体试样

糖果、蜜饯等固体试样，取代表性样品约200g，用组织匀浆机匀浆，装入洁净容器中，密封后于18℃冷冻保存。

5.2半固体试样

果酱、调味酱等半固体试样，取代表性样品约200g，充分搅拌均匀，装入洁净容器中，密封后于4℃冷藏保存。

5.3液体试样

饮料等液体试样，取代表性样品约200mL，充分摇匀，装入洁净容器中，密封后于4℃冷藏保存。

6分析步骤

6.1试样提取

6.1.1固体和半固体试样

称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL提取液，涡旋混合2min，超声提取20min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至100mL容量瓶中。残渣重复提取一次，合并上清液，用提取液定容至刻度，摇匀备用。

6.1.2液体试样

称取5.0g（精确至0.01g）试样于50mL离心管中，加入20mL提取液，涡旋混合2min，超声提取15min，以4000r/min离心5min，将上清液转移至100mL容量瓶中，用提取液定容至刻度，摇匀备用。

6.2净化

6.2.1固相萃取柱活化

依次用5mL甲醇、5mL水活化固相萃取柱，保持柱体湿润。

6.2.2上样

取10mL提取液，以1mL/min的流速通过固相萃取柱。

6.2.3淋洗

用5mL水淋洗固相萃取柱，弃去淋洗液。

6.2.4洗脱

用5mL净化洗脱液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液于10mL刻度试管中。

6.2.5浓缩

将洗脱液在40℃水浴中氮吹至近干，用1.0mL甲醇水（1:1，v/v）溶解残渣，经0.22μm微孔滤膜过滤，供液相色谱分析。

6.3.1色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相当者。

6.3.2流动相：A相为0.1%甲酸水溶液，B相为乙腈。

6.3.3梯度洗脱程序：0min时，A相90%，B相10%；10min时，A相70%，B相30%；15min时，A相50%，B相50%；20min时，A相90%，B相10%；25min时，A相90%，B相10%。

6.3.4流速：1.0mL/min。

6.3.5柱温：30℃。

6.3.6进样量：10μL。

6.3.7荧光检测器：激发波长540nm，发射波长580nm。

6.4标