林木低温胁迫抗冻蛋白 AFP 基因表达 qPCR 内参基因选择试题库及答案.docVIP

林木低温胁迫抗冻蛋白AFP基因表达qPCR内参基因选择试题库及答案

一、单项选择题（每题2分，共10题）

1.以下哪种基因常作为内参基因？

A.AFP基因B.Actin基因C.随机基因

答案：B

2.qPCR中内参基因的作用是？

A.检测AFP表达B.校正上样量差异C.启动反应

答案：B

3.选择内参基因时，其表达应？

A.随低温变化B.不受实验条件影响C.无规律

答案：B

4.内参基因一般是？

A.结构基因B.调控基因C.假基因

答案：A

5.以下不适宜做内参基因的是？

A.GAPDHB.AFPC.18SrRNA

答案：B

6.选择内参基因首先要考虑的是？

A.序列长度B.表达稳定性C.引物难易

答案：B

7.验证内参基因表达稳定性常用方法是？

A.测序B.凝胶电泳C.数据分析软件

答案：C

8.内参基因在不同组织中表达？

A.完全相同B.差异很大C.相对稳定

答案：C

9.下列关于内参基因说法错误的是？

A.无功能基因B.表达稳定C.用于标准化

答案：A

10.选择内参基因时需考虑其？

A.启动子B.终止子C.引物特异性

答案：C

二、多项选择题（每题2分，共10题）

1.常用的内参基因有（）

A.Tubulin基因B.EF1α基因C.Ubiquitin基因

答案：ABC

2.选择内参基因要考虑的因素有（）

A.表达稳定性B.引物设计难度C.基因长度

答案：AB

3.验证内参基因稳定性的方法有（）

A.geNorm算法B.NormFinder算法C.BestKeeper软件

答案：ABC

4.内参基因的特点包括（）

A.广泛表达B.表达量高C.表达稳定

答案：AC

5.在林木低温胁迫研究中，可作为内参基因筛选的有（）

A.持家基因B.低温诱导基因C.随机基因

答案：AB

6.影响内参基因选择的实验因素有（）

A.低温处理时间B.林木品种C.采样部位

答案：ABC

7.以下哪些指标可用于评估内参基因（）

A.Ct值B.熔解曲线C.扩增效率

答案：ABC

8.选择内参基因时对引物的要求有（）

A.特异性强B.扩增效率高C.长度适宜

答案：ABC

9.理想的内参基因应具备（）

A.进化上保守B.与AFP基因共表达C.易检测

答案：AC

10.确定内参基因可通过（）

A.查阅文献B.预实验C.经验判断

答案：AB

三、判断题（每题2分，共10题）

1.任何基因都可以作为内参基因。（×）

2.内参基因表达量不会因低温改变。（√）

3.内参基因引物设计不需要考虑特异性。（×）

4.只需要一个内参基因就可准确校正。（×）

5.持家基因一定是好的内参基因。（×）

6.内参基因用于校正qPCR结果。（√）

7.不同实验条件下内参基因选择相同。（×）

8.选择内参基因无需考虑引物长度。（×）

9.内参基因表达稳定是选择的关键。（√）

10.可以随意选择内参基因用于林木AFP研究。（×）

四、简答题（每题5分，共4题）

1.简述选择内参基因的重要性。

答案：内参基因用于校正qPCR实验中样本上样量、RNA质量等差异，使AFP基因等目标基因表达量的测定更准确可靠，保证实验结果的可比性和有效性。

2.列举两个常用的内参基因并说明其特点。

答案：Actin基因，广泛存在且表达稳定，是细胞骨架重要组成部分；GAPDH基因，参与糖代谢，表达丰度高且稳定，在多种组织细胞中均有表达。

3.如何初步筛选内参基因？

答案：可通过查阅相关文献，了解在类似林木低温胁迫研究中使用的内参基因；也可根据持家基因等理论，选择一些可能稳定表达的基因作为候选内参基因。

4.内参基因引物设计有哪些要点？

答案：引物特异性要强，避免非特异性扩增；扩增效率应在90%-110%之间；引物长度一般18-25bp左右；引物的GC含量在40%-60%。

五、讨论题（每题5分，共4题）

1.讨论在不同林木品种低温胁迫研究中，内参基因选择可能存在差异的原因。

答案：不同林木品种的基因表达调控模式有别，代谢途径和生理特性不同。一些在某品种中稳定表达的内参基因，在另一品种可能受低温影响表达不稳定，所以需针对不同品种筛选合适内参基因。

2.若实验结果显示内参基因表达不稳定，可能