植物组织培养实验步骤与方法.pdfVIP

1.母液配制2.培养基配制

3.外植体选择与灭菌4.外植体接种与培养

5.组培苗驯化移栽6.葡萄组培中常见问题及解决方法

项目六

任务一配制培养基时遇到的问题及对策

任务二污染及对策

任务三离体培养过程中常出现的问题及对策

1.1大量元素配制时出现沉淀物

沉淀物

Mg2+23SO42-

Ca2+1大量元素母液4HSO4-

1.纯度高的药

2.重蒸水溶解

重蒸水

第一次蒸馏第二次蒸馏

3.按顺序溶解

第2种化合物完全溶解第4种化合物完全溶解

0204

0103n

第1种化合物完全溶解第3种化合物完全溶解第n种化合物完全溶解

特别注意:将Ca2+、Mg2+、SO42-和HSO4-等离子错开混合。

1.2有机母液如维生素类在低温保存中易受真菌污染

维生素类营养

丰富，有利于菌类

繁殖

用无菌水溶解，用无菌棕色瓶装置，尽量缩短贮藏时间。

1.3刚刚制好的铁盐溶液放置冰箱后出现结晶

配制时加热搅拌时间过短，FeSO与Na-EDTA鳌

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合不彻底，此时将其冷藏，FeSO便会析出结晶。

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1.两种物质应分别加热溶解再混合，倒入棕色磨口瓶中。

2.先放在室温下一段时间令其充分反应，再转入冰箱中保存。

放置一段时间

2.1接种前培养基出现污染

培养基表面污染

培养基内部污染

培养基表面污染培养基内部污染

空气环境不干净，贮藏的母液受到

瓶口密封不严，而产了污染，培养瓶不洁

生由真菌引起的污染。净，灭菌不彻底等因

素造成。

保持室内洁净；

严格检查瓶口是否封好；

杜绝使用污染了的母液；

严格遵守高压蒸气灭菌程序；

保证灭菌时间。

2.2接种后外植体污染

外植体消毒不彻底

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先用清水漂洗进入无菌室，用无菌水冲洗用无菌纸或无

干净，再用流在70%酒精中3~4次后。