植物快繁技术指南.pdfVIP

细胞工程制药技术

一离体快速繁殖技术

离体繁殖：利用离体培养技术，将植物的外植体在人工培养基和合适的条件下进行

培养，以在短期内获得大量遗传性一致个体的方法。(又称植物快繁)

植物快繁的器官再生类型：

短枝发生型、丛生芽发生型、不定芽发生型、胚状体发生型、原球茎发生型

短枝发生型

类似微型扦插，指外植体携带的带叶茎段，在适宜的培养环境中萌发，形成完整植

株，再将其剪成带叶茎段，继代再成苗的繁殖方法。该方法可一次成苗，遗传稳定，成

活率高，但繁殖系数低。

丛生芽发生型

为大多植物快繁的主要方式，指外植体携带的顶芽或腋芽在适宜培养环境（含外源

细胞分裂素）中不断发生腋芽而呈丛生状芽，将单个芽转入生根培养基中，诱导生根成

苗的繁殖方法。

不定芽发生型

指外植体在适宜培养基和培养条件下，形成不定芽后经生根培养，获得完整植株的

繁殖方法。分为通过愈伤组织产生不定芽和直接产生不定芽两种方式。

外植体涉及多种器官，如茎段、叶、根、花器等。是植物快繁的另一种主要方式，繁殖

系数高，但变异率高，尤其是通过愈伤途径产生的植株。

胚状体发生型

指外植体在适宜培养环境中，经诱导产生体细胞形成体细胞胚，从而形成小植株的

繁殖方法。分为间接途径（经愈伤途径）和直接途径两种。

成苗数量大、速度快、结构完整。但由于对其发生及发育过程了解不够，应用上没有前

两种广泛。

原球茎发生型

是兰科植物特有的一种繁殖方式，指茎尖或腋芽外植体经培养产生原球茎的繁殖类

型。原球茎可以增殖形成原球茎丛。

细胞工程制药技术

一、植物快速繁殖的主要步骤

1、建立无菌培养体系

2、无菌培养体系的快速增殖

3、诱导生根

4、试管苗的驯化与移植

1、无菌培养体系的建立

外植体的选择、灭菌、接种、培养。

初代培养中的注意事项

1）建立无菌培养物(选择合适的外植体)

2）条件合适(筛选适宜的培养基和培养条件)

3）保证无菌(减少污染)

4）技术过关(操作熟练迅速)

5）减少褐变

2、培养物的增殖

1）腋芽增殖：

离体条件下腋芽在细胞分裂素作用下形成丛生芽

激素调节：细胞分裂素（BA）、低浓度的生长素

优点：保持物种的遗传稳定性。

2）不定芽增殖

不定芽：离体培养条件下，通过器官发生重新形成的芽。

激素：一定量的生长素和细胞分裂素。

可能会改变原有的遗传性状。

优点：增殖率高。

体细胞胚胎发生：即诱导胚状体形成，是由植物器官、组织和细胞培养直接发生类胚结

构，最后以胚状体成苗的方式。

胚性愈伤组织：从离体培养的外植体先增殖愈伤组织，然后再从愈伤组织分化出胚状体

是体细胞胚胎发生最常见的方式，能够产生胚状体的愈伤组织称为胚性愈伤组织。

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3、诱导生根

生根培养基一般要求降低无机盐的浓度，提高生长素的浓度，还可适当降低蔗糖的

浓度。具体应根据植物种类而定。

4、试管苗驯化移栽

炼苗（驯化）：移栽前将培养物不开口，移到自然光照下锻炼2-3d，让试管苗接受

强光的照射，使其长得壮实起来，然后再开口炼苗1-2d，经受较低湿度的处理，以适

应将来自然湿度的条件。

二、快繁中应注意的问题

1、遗传稳定性：影响遗传稳定性的因素

外植体的来源

继代培养的时间和次数

再生植株的发生方式

植物生长物质

2、玻璃化及预防

植物组培玻璃化苗的叶和嫩梢呈水晶透明或半透明水渍状；整株矮化肿胀、失绿；叶片

皱缩成纵向卷曲，脆弱易碎；叶表缺少角质层蜡质，没有功能性气孔，不具栅栏组织，

仅有海绵组织。

玻璃化现象产生原因

（1）激素浓度(尤其CTK)增加或CTK/IAA高；

（2）琼脂浓度低；

（3）光照时间大于15h；

（4）温度低；

（5）通风条件不好；

（6）培养基离子种类及比例不适宜。