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宠物克隆技术师初级细胞培养技术考试题

一、选择题（每题2分，共20题）

1.在细胞培养过程中，哪种培养基最常用于贴壁细胞的常规培养？

A.LB培养基

B.F12培养基

C.DMEM培养基

D.RPMI1640培养基

2.细胞消化时，常用哪种酶组合进行贴壁细胞的分离？

A.胰蛋白酶+胶原酶

B.胰蛋白酶+EDTA

C.胰蛋白酶+透明质酸酶

D.胶原酶+透明质酸酶

3.细胞冻存时，常用的保护剂是？

A.甘露醇

B.葡萄糖

C.DMSO（二甲基亚砜）

D.乙二醇

4.下列哪种方法不属于细胞的无菌操作技术？

A.超净工作台操作

B.灭菌处理

C.液体石蜡覆盖培养

D.灭菌接种环使用

5.细胞培养中，pH值通常维持在多少？

A.6.5-7.0

B.7.0-7.4

C.8.0-8.5

D.5.0-5.5

6.哪种培养基适合悬浮细胞的培养？

A.L-15培养基

B.MCDB131培养基

C.COULTURE培养基

D.FBS（胎牛血清）

7.细胞计数时，常用的计数方法是？

A.沉降计数法

B.显微镜直接计数法

C.荧光显微镜计数法

D.自动化细胞计数仪

8.细胞培养中，哪种现象提示细胞可能被污染？

A.细胞生长缓慢

B.细胞形态异常

C.培养基颜色改变

D.以上都是

9.下列哪种试剂用于细胞培养器的灭菌？

A.乙醇

B.次氯酸钠

C.高锰酸钾

D.甲醛

10.细胞传代时，通常建议接种密度是多少？

A.1×102cells/mL

B.1×10?cells/mL

C.1×10?cells/mL

D.1×10?cells/mL

二、判断题（每题2分，共10题）

1.细胞培养过程中，完全无菌的环境是必要的。（×）

2.胰蛋白酶消化细胞时，需要用PBS缓冲液终止反应。（√）

3.细胞冻存时，冻存液中的DMSO浓度通常为10%。（√）

4.细胞培养中，培养基更换频率越高越好。（×）

5.污染的细胞培养物可以直接丢弃，无需处理。（×）

6.贴壁细胞培养时，培养皿需要预温至37℃。（√）

7.细胞计数时，血细胞计数板的方格数为25×16。（√）

8.细胞冻存时，快速冷冻会导致细胞损伤。（√）

9.细胞培养中，FBS（胎牛血清）可以长期反复使用。（×）

10.细胞培养基中的碳酸氢钠需要调节pH值。（√）

三、简答题（每题5分，共5题）

1.简述细胞培养中无菌操作的基本步骤。

2.解释细胞消化和细胞传代的概念。

3.说明细胞冻存和复苏的注意事项。

4.描述细胞培养中常见的污染类型及处理方法。

5.列举三种常用的细胞培养基及其适用范围。

四、实验操作题（每题10分，共2题）

1.请详细描述贴壁细胞的消化和传代操作步骤。

2.设计一个细胞冻存和复苏的实验方案，并说明关键步骤。

答案与解析

一、选择题答案与解析

1.C

解析：DMEM培养基是常用的贴壁细胞培养基，成分丰富，适合多种细胞系。

2.B

解析：胰蛋白酶+EDTA是常用的贴壁细胞消化组合，EDTA可抑制胶原酶活性，避免细胞间桥形成。

3.C

解析：DMSO是细胞冻存的标准保护剂，可降低细胞内冰晶形成，提高存活率。

4.C

解析：液体石蜡覆盖培养属于组织培养技术，不属于常规细胞无菌操作。

5.B

解析：细胞培养的pH值通常维持在7.0-7.4，以保证酶活性。

6.B

解析：MCDB131培养基适合悬浮细胞（如骨髓细胞）培养。

7.D

解析：自动化细胞计数仪是目前最精确的细胞计数方法。

8.D

解析：细胞污染会导致生长异常、培养基变色等，需及时处理。

9.A

解析：乙醇是常用的细胞培养器灭菌剂，快速有效。

10.C

解析：常规贴壁细胞接种密度为1×10?cells/mL，以保证生长空间。

二、判断题答案与解析

1.×

解析：完全无菌环境难以实现，但需严格防止污染。

2.√

解析：胰蛋白酶需用PBS终止，避免损伤细胞。

3.√

解析：DMSO浓度通常为10%，过高会损伤细胞。

4.×

解析：频繁更换培养基可能导致细胞失活，一般3-4天更换一次。

5.×

解析：污染需销毁，避免交叉感染。

6.√

解析：预温可防止细胞冷刺激。

7.√

解析：血细胞计数板标准方格为25×16。

8.√

解析：快速冷冻（-80℃或液氮）可减少冰晶损伤。

9.×

解析：FBS应一次性使用，反复使用会降低活性。

10.√

解析：碳酸氢钠是缓冲剂，用于调节pH。

三、简答题答案与解析

1.细胞培养中无菌操作的基本步骤

-手部消毒：75%酒精擦拭或使用无菌手套。

-工作台