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细胞培养技术面试常见问题解答

一、基础知识（共5题，每题2分）

1.什么是细胞培养？简述其基本原理和应用领域。

答案：细胞培养是指在体外条件下，通过提供适宜的营养、温度、pH值和气体环境，使细胞或组织生长、增殖的技术。基本原理是模拟细胞在体内的生理环境，通过添加基础培养基、血清等物质满足细胞的生长需求。应用领域包括药物研发、疫苗制备、生物制品生产、细胞治疗、疾病模型构建等。

解析：细胞培养是生物技术的基础，理解其原理和应用是岗位的基本要求。需掌握体外培养的关键条件（如无菌、温度、CO?浓度）及行业应用场景。

2.常用的细胞培养基有哪些类型？简述其特点。

答案：常用培养基类型包括：

-基础培养基（如DMEM、MEM）：提供基本营养成分，需添加血清等；

-完全培养基：在基础培养基上添加血清、生长因子等，支持细胞快速生长；

-无血清培养基：不含血清，通过添加替代物（如纤连蛋白）支持细胞生长，减少异源蛋白污染。

解析：不同培养基适用于不同细胞类型，需根据实验需求选择。无血清培养基在GMP生产中更常用，需注意其优化难度。

3.细胞培养过程中如何控制无菌操作？列举关键措施。

答案：关键措施包括：

-环境消毒：超净工作台定期消毒，使用75%酒精擦拭台面；

-无菌耗材：一次性使用无菌培养皿、移液器等；

-操作规范：手部消毒、穿戴无菌手套、避免气溶胶；

-灭菌处理：培养基、试剂高压灭菌或过滤除菌。

解析：无菌控制是细胞培养的核心，需结合GMP规范（如药企要求）进行操作。

4.细胞传代时需要注意哪些问题？如何判断细胞状态？

答案：注意事项：

-消化时间：避免过度消化导致细胞损伤；

-接种密度：根据细胞类型调整，避免过密或过稀；

-冻存复苏：使用DMSO等保护剂，快速复温。

细胞状态判断：观察形态（贴壁、散落）、活力（台盼蓝染色）、生长曲线。

解析：传代是日常操作，需结合细胞特性（如CHO细胞需低血清传代）优化流程。

5.什么是细胞老化？简述其生物学特征。

答案：细胞老化是指细胞在传代过程中逐渐失去增殖能力，表现为：

-接触抑制：达到一定密度停止生长；

-基因组不稳定：DNA损伤累积；

-衰老表型：β-半乳糖苷酶活性升高。

解析：老化是细胞培养的局限性，需通过限制传代次数或使用永生化细胞（如HEK293）解决。

二、实验操作（共8题，每题3分）

6.如何制备和分装细胞培养基？简述关键步骤。

答案：步骤：

1.称量：精确称量基础培养基粉末；

2.溶解：加蒸馏水溶解，加热至完全透明；

3.调节：调整pH值（如DMEM为7.2-7.4）、加双抗；

4.分装：高压灭菌（15min，121℃），4℃保存或冻存。

解析：需符合GMP要求，药企生产需记录批次号和灭菌参数。

7.冻存细胞时如何选择冻存液？冻存温度如何设置？

答案：冻存液：通常含10%DMSO和基础培养基，部分细胞需添加血清；

冻存温度：-80℃或液氮（-196℃），需逐步降温（如4℃→-20℃→-80℃）。

解析：冻存是细胞保存的关键，DMSO浓度需根据细胞类型调整（如CHO细胞5-10%）。

8.如何进行细胞计数？常用方法有哪些？

答案：方法：

-血球计数板：显微镜下计数，需校正体积；

-细胞计数仪：自动计数，结果更精确；

-MTT法：通过代谢活性间接反映细胞数量。

解析：药企常用自动计数仪，需定期校准确保准确性。

9.细胞污染有哪些类型？如何鉴别和消除？

答案：类型：

-细菌污染：可见浑浊、菌落；

-酵母污染：可见圆形菌落；

-支原体污染：细胞形态异常、生长缓慢。

消除：高压灭菌培养皿、更换无菌耗材、使用支原体检测试剂盒。

解析：支原体污染隐蔽，需定期检测（药企强制要求）。

10.细胞贴壁培养与悬浮培养有何区别？如何选择？

答案：区别：

-贴壁培养：细胞需附着表面（如CO?处理塑料皿）；

-悬浮培养：细胞在液体中自由生长（如动物细胞工厂）。

选择：贴壁适用于需要接触抑制的细胞（如CHO），悬浮适用于大规模生产（如单抗）。

解析：需结合工艺需求（如药企多采用悬浮培养降低批次差异）。

11.如何进行细胞活力检测？常用指标有哪些？

答案：方法：

-台盼蓝染色：活细胞不着色，死细胞蓝染；

-CCK-8法：通过MTT代谢反映活力；

-流式细胞术：检测细胞凋亡等。

指标：活力率（台盼蓝）、OD值（CCK-8）。

解析：药企常用CCK-8，需与细胞计数结合分析。

12.细胞冻存后复苏失败的原因有哪些？如何提高成功率？

答案：原因：

-冻存液浓度不当；

-降温速度过快；

-复苏时温度过高。

提高成功率：优化冻存液、逐步复温（如-80℃→37℃）、预温培养基。

解析：复苏是关键