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聚羟基脂肪酸酯（PHA）的提取方法概述

对大规模的生物制造工业来说，将PHA从非PHA的细胞生物质（NPCM,

主要包括多肽、脂质、DNA、RNA和肽聚糖）中分离出来，需要高额的成本和

环境负担口4］。因此研究提取PHA的方法也十分重要，提取PHA主要虑的因素

有生产PHA的微生物菌株、分子水平上PHA的组成成分（scl-PHA或mcl-PHA）、

PHA胞内负荷成度、所需PHA产品的纯度及化学溶剂的处理问题等。

1有机溶剂抽提法

室温条件下，卤化溶剂如氯仿、二氯甲烷和氯代仁共沸物如122•三氯乙烷

等，都可用于提取scLPHA和mcl・PHA,并且产物纯度比较高，因为除了脂质，

NPCM中其他成分都不溶于这些卤化溶剂。但PHA在这些溶剂中的溶解度都比

较低，当浓度大于5%肘，溶液就变得十分粘稠，导致PHA和其他物质难以分

开。加入PHA反溶剂，通常使用低分子量的醇（主要使用乙醇或甲醇）、己烷、

乙醒、丙酮或水来预处理菌体，显著地增加PHA的纯度、分子量和回收的效

率。目前实验室常使用氯仿提取PHA,使用热丙酮洗涤菌体，干燥后再加入10

倍体积的氯仿振荡，去除杂质后得到澄清的PHA溶液，进行旋蒸浓缩，再加入

5倍体积的PHA反溶剂如冷乙醇，使PHA沉淀后过滤压干。该方法对于不同样

品会有所变化，主要是不同溶剂之间的比例和振荡肘间的选择，但卤化溶剂对

人体健康和环境都有极大影响，因此探索安全的提取试剂十分重要，目前，乳

酸酯被认为是一个较好的溶剂向。以PHB为例，可使用乙酸、乙酸肝、n•甲基

毗咯烷酮和四氢味喃来提取㈣，scLPHA可使用乙酸酯和低分子的酮来提取，对

于mcl-PHA来说,可溶scl-PHA的试剂均可在室温条件下用来提取mcLPHA。

2酶法

所谓酶法是使用多种酶混合液来消化NPCM,通常会与表面活性剂或有机

溶剂等相结合来获得较高纯度的PHAO帝国化学公司开发了一种Zeneca反应:

首先在高温达150C下使细胞裂解并变性，再采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋

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白酶消化NPCM,最后使用阴离子表面活性剂分解剩余的细胞质。这种方法提

取的PHA纯度可达95%四。虽然使用酶法可以从水相中直接分离PHA,但由

于NPCM的成分复杂，而且酶作用的反应条件比较严格，若想得到纯度更高的

产物，提取步骤也要相应的增加，因此酶法在成本和放大过程等方面仍然有很

大的限制。

3次氯酸盐破碎细胞法

使用次氯酸盐消化NPCM时会形成有毒的卤化化合物，而且很难从PHA

中完全除去这些物质D9］。但当菌体与次氯酸盐的浓度比例在一定范围肘，如

pH=9.8的灰氯酸钠溶液，以1.1%w/v)的菌体干重浓度，可以获得纯度为95%

的PHB,而且分子量达60万，适合做热塑性材料。由于使用次氯酸盐提取可以

获得高纯度PHA,所以这种方法在医疗应用上被广泛使用，但其提取的PHA分

子量较小。而真空冷冻干燥会使PHB的结晶状态不可逆，在使用次氯酸盐溶液

前需要对菌体进行冻干，这样可以显著提高PHB的分子质量。所以将氯仿法和

次氯酸盐法相结合，可以弥补分子量小的缺陷。将菌体冷冻干燥后，加入次氯

酸盐和氯仿的混合溶液，当次氯酸盐从细胞中分离出PHA时，会立即被氯仿溶

解，规避了PHA被灰氯酸盐破坏的可，然后用不同极性的溶液(水、丙酮和

乙醇)清洗后加入氯仿以获得更高的纯度。再次加入水以分离溶剂和细胞残留

物，将氯仿旋蒸干，可以得到一层薄膜即高纯度的PHAM。】。次氯酸盐的最适浓

度为30%,在30C摇床中振荡反应90min,以体积比1:1的氯仿和次氯酸钠溶

液回收可得纯度为97%,分子量为100万的PHB。另外还可使用表面活性剂辅

助次氯酸盐提取PHA,使用表面活性剂对冻干菌体进行预处理可以去除85%的

蛋白，再用灰氯酸盐溶液进一步消化，可以消化剩下的10%的蛋白质和肽聚糖，

从而进一步提高PHA的纯度。

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