表面微生物测试操作作业规程.docVIP

表面微生物测试操作规程

ZLSOP表面微生物测试操作规程

实施日期

起草

审核

同意

部门

质控部

质控部

质保部

质量技术副总

姓名

张淑萍

周里欣

李海军

章运典

署名

日期

分发部门

质量控制部

1目标：建立洁净室（区）表面微生物测试操作规程，确定洁净区中物体（包含工作服）表面微生物污染程度和洁净区消毒效果。

2适用范围：适适用于企业洁净室（区）、无菌室和净化工作台表面，洁净室（区）设备表面，进入洁净室区人员表面。日常动态检测和空气净化系统确定时检测。

3责任者：质量控制部、质量确保部、化验员、负责洁净区洁净度动态测试质监员。

内容

1测试方法：接触平皿法、棉签擦拭法、表面冲洗法。测试方法必需考虑取样正确性和代表性，能够从定性和定量来选择。

1.1接触平皿法：只适适用于规则物体表面。

1.2棉签擦拭法：适适用于平皿接触法不适用设备和不规则表面取样。棉质和涤纶棉签能够浸入到肉汤培养基内得到定性结果。

1.3表面冲洗法：当需要确定设备表面生物载荷时，或面积较大时。用无菌水来冲洗内表面，然后搜集、膜过滤后得到定量结果。

2仪器、用具和培养基：

2.1仪器：电热恒温干燥箱、压力蒸汽灭菌器、药品天平、冰箱。

2.2用具：培养皿（ф55mm×18mm培养皿）

2.3培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。

3操作前准备及要求

3.1培养基平皿制备

3.1.1培养皿清洗和灭菌：取培养皿，用饮用水清洗，凉干后浸入清洁液中，浸泡12小时以上，用饮用水冲洗洁净，再用纯化水冲洗三遍，置铁筒等密闭容器内，121℃湿热灭菌20分钟，备用。

3.1.2培养基制备：称取大豆酪蛋白琼脂40g，置ml烧杯中，加水1000ml，置电热炉上，加热煮沸使溶解，滤过，分装于500ml三角瓶中，用棉塞把瓶口塞好，包扎牛皮纸，在121℃湿热灭菌15分钟，备用。

3.1.3培养基平皿制备：将培养基加热熔化，冷却至约45℃时，在无菌操作下取培养基约10ml，注入无菌培养皿中，加盖后室温放至凝固，制备后培养基平皿在2℃～8℃存放。使用前应仔细检验每个培养皿质量，培养皿及培养基有变质、破损或污染不能使用，存放时间不得超出一周。

3.3.2表面微生物检测人员穿戴和生产区空气洁净度等级相适应工作服，根据《微生物检验试验室管理规程》进入洁净室（区），外面衣服不能带进洁净区，盛装培养皿容器从物流通道或传输窗进入洁净区。

4测试状态：

4.1洁净室(区)已处于正常生产状态，设备在指定方法下运行，而且有指定人员根据规范操作。

4.2洁净室（区）温度和相对湿度：温度应控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间。

4.3压差：洁净区和非洁净区之间，不一样等级洁净区之间压差应该不低于10帕斯卡，产尘量大操作间对相邻房间应保持相对负压。

5取样

5.1取样点数目及其布局应依据以下多个方面设置：空调系统初始确定结果；房间（或区域）大小和布局；房间（或区域）用途；和暴露产品距离，人流物流方向等。对于同一洁净区或区域，每个相同取样物体应采1个样。

5.2取样方法及步骤

5.2.1培养基平皿进入洁净室

培养基平皿随检测人员进入一更后缓冲间，检测人员换洁净工作鞋、洗手消毒后，用蘸有75%乙醇溶液丝光毛巾擦拭盛放培养基平皿铁桶外表面，进入二更室，检测人员按摄影应更衣程序更衣后，进入二更后缓冲间，手消毒后，再用蘸有75%乙醇溶液丝光毛巾擦拭盛放培养基平皿铁桶外表面，烘干，即可进入C、D级洁净区使用；培养基平皿在进入A级洁净区前应先将盛放培养基平皿铁桶置紫外灯下灭菌20min。

5.2.2取样方法

5.2.2.1A级洁净区检测人员戴上无菌手套，将密闭铁桶放置于A级环境下，打开铁桶盖，取出所需数量培养基平皿后盖上铁桶盖，取出培养基平皿其中1只平皿不打开平皿盖，正放在A级环境下作为空白对照。为检测培养皿运输或搬动过程中培养基是否受到污染，另取3只培养基平皿作为空白对照。其它平皿进行下列取样操作：

5.2.2.1.1设备环境取：样在关键生产操作完成后，打开培养基平皿，将培养皿扣在灌装机表面，使培养基和灌装机表面接触，10s后盖盖，在取样培养皿外编号标识，将培养皿放回密闭铁桶内。采样结束后立即用注射用水及消毒剂对取样部位清洗消毒。

5.2.2.1.2人员取样：在关键生产操作完成后，对在A级环境下操作人员进行五指手套取样。打开培养皿，使操作人员五指轻轻按在培养基表面，10s后盖盖，在取样培养皿外编号标识，将培养皿放回密闭铁桶内。取样结束后在空白对照培养皿外编号标识，将空白对照培养皿放入铁桶内。

5.2.2.2C、D级洁净区检测人员将盛放培养皿密闭铁桶放在C、D级洁净区工作台上，