目的基因的克隆.pptVIP

cDNA法分离目的基因的基本程序特异分离程序提取细胞总mRNA，琼脂糖凝胶电泳分离，回收目标mRNA，由此合成双链cDNA，然后进行克隆特异分离程序较适用于mRNA丰度极高的目的基因克隆如血红蛋白基因等第30页，共54页，星期日，2025年，2月5日cDNA法分离目的基因的基本程序差异分离程序利用两组细胞mRNA种类的差异，分离克隆差异mRNA所对应的cDNA，因而这种程序较适用于分离克隆新基因例如：正常的大鼠FR3T3成纤维细胞中，有些新基因是不能自发表达的，需在多瘤病毒感染之后方可转录。任务是要分离克隆这些新基因，进而研究其生物学功能第31页，共54页，星期日，2025年，2月5日cDNA法克隆目的基因的局限性并非所有的mRNA分子都具有polyA结构细菌或原核生物的mRNA半衰期很短mRNA在细胞中含量少，对酶和碱极为敏感，分离纯化困难仅限于克隆蛋白质编码基因第32页，共54页，星期日，2025年，2月5日D化学合成法化学合成法的基本战略化学合成的单元操作DNA化学合成的用途第33页，共54页，星期日，2025年，2月5日化学合成法的基本战略全基因合成化学合成目的基因的前提条件是基因的DNA序列已知，有三种战略：小片段粘接法：混合退火根据目的基因全序列，分别合成12-15