玻璃器皿清洗灭菌操作指南.pptxVIP

一、目的要求

1.学习玻璃器皿的清洗、烘干、包扎技术。

2.学习高压蒸汽灭菌的基本原理和操作方法。;二、实验材料

培养皿、试管、棉花、纱布、棉线、报纸、聚丙烯薄膜，高压蒸汽菌锅、电热干燥箱等。

;三、实验内容

（一）玻璃器皿的清洗：

1.新购的玻璃器皿的洗涤

将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。

2.常用旧玻璃器皿的洗涤

确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；

吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，再进行清洗。;3.带菌玻璃器皿的洗涤

凡实验室用过的菌种以及带有活菌的各种玻璃器皿，必须经过高温灭菌或消毒后才能进行刷洗：

（1）带菌培养皿、试管、三角瓶等物品，做完实验后放入消毒桶内，用0.1MPa灭菌20～30min后再刷洗。

（2）带菌载玻片及盖玻片，使用后不得放在桌子上，立即分别放入盛有0.25%新洁尔灭溶液的玻璃缸内消毒24h后，用夹子取出经清水冲干净；如用于细菌染色的载玻片，需放入50g/L肥皂水中煮沸10min，再用清水洗干净。最后将载玻片浸入95%酒精中，取出晾干，保存备用。;（二）玻璃器材的晾干或烘干

1.玻璃器皿若不急用，可放在实验室中自然晾干；

2.玻璃器皿若急用，可将玻璃器皿放在托盘中，再放入干燥箱内，60～80℃烘干。

（三）器皿的包扎：

要使灭菌后的器皿仍保持无菌状态，需在灭菌前进行包扎。

1.培养皿的包扎：洗净的培养皿烘干后每6～8套叠在一起，用报纸包扎卷成一筒，然后进行灭菌。;培养皿包扎方法如下：

培养皿由一个平面圆盘状的底和一个盖组成。现在我们包扎所用的培养皿其规格为直径90mm。

取一张双层报纸，平放于桌面，将8个培养皿用手扶住，整齐地放在报纸边缘，居中放置（注意：培养皿盖方向一致）。

培养皿与报纸紧贴，将报纸卷起，用手扶住，将培养皿两边的报纸折叠，注意报纸要与培养皿贴合紧。一边滚动培养皿，一边将报纸沿着培养皿的边缘折叠紧，避免太松动，报纸折叠覆盖培养皿的面积大约为培养皿的一半。

包扎到最后，将培养皿立起来，???多余的报纸扎到报纸内部压紧，然后以同样的方法扎好另外一端。用橡皮筋扎好，即可用于灭菌。;

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;2.试管：试管需要做合适的棉塞，棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。制作棉塞时，要求棉花紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，松紧适宜。过紧易挤破管口和不易塞入；过松易掉落和污染。棉塞的长度不小于管口直径的2倍，约2/3塞进管口。

试管棉塞的制作和包扎：

取10cm*10cm的一块纱布，纱布中央位置覆盖于试管口，取棉花塞入试管口3cm定型，用棉线扎进紧。将棉塞塞入试管口，取出棉塞时可听到清脆的响声即为合格的棉塞。

取聚丙烯薄膜，将其一端用橡皮筋扎紧，将若干棉塞放入聚丙烯薄膜袋内，将另一端用橡皮筋扎紧即可用于灭菌。;试管的包扎：

取聚丙烯薄膜，将其一端用橡皮筋扎紧，将若干试管整齐放入聚丙烯薄膜袋内，将另一端也用橡皮筋扎紧即可用于灭菌。;

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;3.吸管：洗净、烘干后的吸管，在吸口的一头塞入少许脱脂棉花，以防在使用时造成污染。塞入的棉花量要适宜，多余的棉花可用酒精灯火焰烧掉。每支吸管用一条宽约4~5cm的纸条，以30~50℃的角度螺旋形卷起来，吸管的尖端在头部，另一端用剩余的纸条打成一结，以防散开，标上容量，若干支吸管包扎成一束进行灭菌。使用时，从吸管中间拧断纸条，抽出试管。;

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;（四）玻璃器皿等的灭菌----高压蒸汽灭菌法

1.高压蒸汽灭菌锅构造：

锅盖：锅盖上有安全阀、放气阀（放气阀下方有软管相连）、压力表（红色线指示温度，黑色线指示压力）。

紧固螺栓：用于紧固锅盖。

灭菌桶：用于装灭菌物品。

电热管：

电源开关：

排水阀：灭菌锅不使用时，可通过放水阀将锅内的水排出。

电源插头：;2.高压蒸汽灭菌操作步骤：

（1）加水

在外筒内加入适量的清水，水位一定要超过电热管2cm以上，也不宜过多，水位不要超过搁筒架最上端。连续使用时，必须在每次操作前补足水，以免烧坏电热管和发生意外事故。

（2）堆放

将待灭菌的物品包扎后放入灭菌筒（内筒），注意：各包之间留有间隙，不要过紧，以利于高压蒸汽的穿透，提高灭菌效果。

（3）密封

物品堆放完毕后，盖上锅盖时将放气软管插入灭菌筒内侧的半圆槽内，对准紧固螺栓，依次、逐步、均匀拧紧相对的两个紧固螺栓，使盖与锅体密合。;（4）加热

插上电源插头，打开电源开关，加热开始。待压力表指针升至0.05MPa时，打开放气阀，使桶内空气和冷凝水随加热产生的压力逸出，待压力表指针降至零点3分钟后或者喷出的蒸汽较稳定时，再关闭放气阀。此时压力表指针会随着加热逐渐上升，指示灭菌锅内压力。

（5）灭菌

当压力升至0.1MPa时，锅内温度相当于