基因克隆和表达的载体.pptVIP

*欢迎02级农业生物技术班同学们听课！Slide*Ⅱ.修饰酶切识别位点天然的λ-DNA上有多个酶切位点，如：EcoRI5个，HindIII7个，这些多余的酶切位点必须被修饰。一般利用自然选择法获得限制性位点缺失的λ品系。自然选择法可以利用一个产生EcoRI的大肠杆菌，大部分侵入细胞的λDNA分子会被限制性酶破坏，少部分能够成活，这些就是突变型的噬菌体，其EcoRI位点缺失了。*欢迎02级农业生物技术班同学们听课！Slide*通过自然选择法筛选无EcoRI识别位点*欢迎02级农业生物技术班同学们听课！Slide*λ-DNA的抽提1)大肠杆菌培养至对数生长期（在含有乳糖的培养基中）

2)加入λ-噬菌体或重组λ－噬菌体悬浮液，37℃培养1小时

3)用新鲜培养稀释，继续培养4-12小时

4)高速离心，沉淀噬菌体

5)苯酚抽提，释放λ-DNA

6)乙醇或异丙醇沉淀DNA3.3.2.3重组?DNA分子的体外包装入噬菌体DNA必须进行体外包装，才能成为有活性的病毒颗粒。入噬菌体的包装容量为野生型入噬菌体DNA（48kb）的75％～105％，即约36.4~51kb.从入噬菌体突变株感染的溶原菌株，提取噬菌体包装所需的全部蛋白质。2005年8月11日6时44分欢迎02级农业生物技术班同学们听课！Sl