神农香菊CiMYB4基因克隆及其对野菊遗传转化的探索与解析.docxVIP

神农香菊CiMYB4基因克隆及其对野菊遗传转化的探索与解析

一、绪论

1.1研究背景

神农香菊（ChrysanthemumaromaticumJ.ZhouetJ.Y.Chen）是菊科菊属的一种多年生草本植物，为中国湖北神农架地区的特有种，常分布于海拔2000米以上向阳开阔的空旷地。其植株矮小，全株疏被白色柔毛，花、叶及根均具浓郁香气，茎基部带紫红色，叶片较小而厚，呈深绿色，上面叶脉隆起，下面具凹陷小腺体，花小且呈黄色。神农香菊具有极高的药用价值，其花、叶含有α-侧柏酮、β-侧柏酮及龙脑等萜类化合物，还有绿原酸、刺槐素、芹菜素、木犀草素、β-谷甾醇、β-胡萝卜苷等成分。这些成分赋予了神农香菊杀菌消炎、平肝明目、散风降压、清咽利喉、清热解毒等功效，可用于防治感冒、头痛、菌痢、肠炎、冠心病和高血压等疾病。同时，从神农香菊中提取的香精，香味独特且保香时间长，无毒无害，在日化、饮料、卷烟等行业也有广泛应用，如被应用到卷烟生产中，不仅具有独特的香味，还可以使烟气细腻柔和，缓解喉部的不适反应。

随着对神农香菊研究的深入，其基因层面的研究逐渐受到关注。基因是决定植物各种性状和功能的关键因素，对神农香菊基因的研究有助于深入了解其药用成分合成的分子机制、生长发育调控机制以及对环境适应的遗传基础。MYB转录因子作为植物中广泛存在且功能多样的一类转录因子，在植物次生代谢、生长发育、环境应答等多个生物学过程中发挥着关键作用。在次生代谢方面，MYB转录因子能够调控苯丙素途径中酚类物质合成的关键酶基因表达，从而控制次生代谢产物的合成。因此，对神农香菊中MYB转录因子基因的研究，对于解析其药用成分合成途径、提高药用成分含量以及培育优良品种具有重要意义。

1.2神农香菊研究现状

在生物学特性研究方面，神农香菊作为多年生草本植物，具有独特的形态特征和生长环境要求。其植株矮小，全株散发浓郁香气，这一特性使其区别于其他菊属植物。神农香菊主要分布在湖北神农架地区海拔2000米以上的向阳开阔空旷地，对生长环境的光照、温度、土壤等条件有特定需求。研究表明，其生长受到海拔高度、光照强度和土壤肥力等因素的显著影响，在适宜的环境条件下，神农香菊能够更好地积累次生代谢产物，展现出更强的药用价值和芳香特性。

在基因学研究成果方面，近年来取得了一系列重要进展。通过转录组测序技术，科研人员对神农香菊的基因表达谱进行了全面分析，鉴定出了许多与萜类化合物合成、芳香物质形成相关的基因。在萜类化合物合成途径中，克隆和鉴定了多个关键的萜类合酶基因，这些基因编码的酶能够催化萜类化合物的合成，对神农香菊的药用和芳香特性起到了关键作用。在芳香物质形成方面，也发现了一些参与苯丙烷类代谢途径的基因，这些基因与芳香物质的合成密切相关。此外，通过比较基因组学研究，揭示了神农香菊与其他菊属植物在基因序列和基因结构上的差异，为进一步研究其遗传特性和进化关系提供了重要线索。这些基因学研究成果为深入了解神农香菊的生物学特性和开发利用提供了坚实的理论基础，也为后续研究神农香菊CiMYB4基因的克隆及功能分析奠定了基础。

1.3植物MYB转录因子研究进展

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一，在植物的生长发育、次生代谢、环境应答等多个生理过程中发挥着至关重要的作用。

从结构特征来看，MYB转录因子的得名源于其结构上都有一段保守的DNA结合区，即Myb结构域。大多数MYB蛋白在N端含有一段由氨基酸残基组成的Myb结构域，该结构域约由51-52个氨基酸组成，包含一系列高度保守的氨基酸残基和间隔序列。其中，每隔约18个氨基酸会规则间隔着一个色氨酸残基，这些色氨酸残基参与空间结构中疏水核心的形成，对维持结构域的稳定性至关重要。在每个保守的色氨酸前后，还存在一些高度保守的氨基酸，例如在第一个色氨酸的C-末端通常是一簇酸性氨基酸，正是这些保守的氨基酸残基使MYB结构域折叠成螺旋-螺旋-转角-螺旋结构，该结构能够特异性地与DNA结合，从而调控基因的表达。

根据MYB基因包含的R结构（Myb结构域）的个数，可将MYB转录因子分为四个亚类。1R-MYB/MYB-related亚类只含一个R结构域，单一R结构的MYB蛋白可存在于肽链的两端或中间，该类蛋白是重要的端粒结合蛋白，主要作用是维持染色体结构的完整性，同时在调节基因转录过程中也发挥一定作用。R2R3-MYB亚类含有两个R结构域，是植物中数目最多的一类MYB蛋白。它们在N端都含有两个R结构（R2R3），一般在C端具有转录激活功能，广泛参与细胞分化、激素应答、次生代谢、环境胁迫以及抵抗病虫侵害等过程。