人教2003课标版 高中生物 选修1专题5课题2　多聚酶链式反应扩增DNA片段(共22张PPT).pptVIP

多聚酶链式反应（PCR）原理人教版生物高二选修1

在现代生物技术中，人类基因组计划、基因工程、基因诊断、基因检测、古生物鉴定以及刑事案件侦破都离不开对DNA分子碱基序列的分析。而分析DNA碱基序列，就需要一定量的DNA片段，但是我们却不总是能够获得足够量的目的DNA，那么我们怎样才能迅速获得足够量的DNA片段呢？今天我们来研究学习如何快速获得大量DNA分子拷贝的PCR技术原理。

教学内容一、DNA的胞内复制二、PCR原理三、PCR反应过程

一．DNA胞内复制1、复制原理首先，在解旋酶的作用下，由ATP供能，DNA发生解旋形成两条DNA单链。其次，在DNA单链的3’端，在RNA聚合酶在作用下，合成RNA引物。再次，在DNA聚合酶的作用下，从引物的3’端开始合成DNA子链。最后，DNA聚合酶将引物切去，并合成空缺处DNA单链，再将不连续的DNA子链连接起来。

复制特点：边解旋边复制半保留复制复制方向：复制条件：1.模板母链2.酶解旋酶DNA聚合酶3.原料4种dNTP4.引物两种引物复制结果：5’端3’端

二、PCR原理1.热变性原理

2.耐高温的TaqDNA聚合酶解决了普通酶高温失活的问题，促进了PCR技术的自动化。3.需要一定的缓冲溶液。DNA模板、两种引物、四种dNTP、Taq酶

三、PCR的反应过程

1、变性在80～100℃时，DNA双螺旋打开，形成两条DNA单链，称为变性。2、复性（退火）在50～60℃左右时，两条DNA单链与引物形成双螺旋结构，称为复性。3、延伸在70～80℃左右时，引物3’端在Taq酶的作用下不断延伸，形成两条新的子链，称为延伸。

PCR循环--变性

PCR循环--变性

PCR循环--变性

PCR循环—复性（退火）

PCR循环—延伸

PCR循环—延伸

PCR循环—延伸

PCR循环—延伸

探究1.PCR与DNA的胞内复制有哪些异同点？

探究2.PCR反应过程中使用TaqDNA聚合酶有什么优点？高温解决了打开双链的问题，但是，又导致DNA聚合酶失活的问题，耐高温的TaqDNA聚合酶解决了高温导致DNA聚合酶失活的问题，促成了PCR技术的自动化

探究3.PCR有哪些应用？医学诊断物种鉴定基因检测人类基因组计划

课堂检测1.1.聚合酶链式反应(PCR技术)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，其简要过程如右图所示。下列关于PCR技术叙述不正确的是()A．PCR技术是在实验室中以少量DNA制备大量DNA的技术B．反应中新合成的DNA又可以作为下一轮反应的模板C．PCR技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增D．应用PCR技术与探针杂交技术可以检测基因突变

解析：PCR技术是人工合成DNA的方法，原料是脱氧核苷酸而不是核糖核苷酸。答案：C

2.突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物和DNA聚合酶的作用分别是什么？答案：引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点；DNA聚合酶的作用是从引物的3′端开始催化DNA链的延伸。