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DesignedbyDanny精美模板共色第1页，共14页，星期日，2025年，2月5日选题依据、研究现状协同作用的评价以及对酶活的影响协同作用及机制（部分）的研究研究方法与技术路线揭示协同作用下酶活的变化背景及意义研究内容研究创新点技术实施路线预期成果Contents工作进展及安排计划安排第2页，共14页，星期日，2025年，2月5日背景及意义（一）1、如何能在肝细胞功能性损伤之前，从源头上进行早期的预防和干预措施、防止肝脏损伤的增加，对酒精性肝病的防治具有深刻意义。2、枸杞中含有的LBP能够进行免疫调节、清除自由基及抗衰老、抗肿瘤、降血糖、保护心血管等，同时具有低系统毒性的优点。已有研究表明其对酒精肝的抑制和治疗有显著疗效。3、研究表明，补锌能够通过非MT依赖性的方式抑制生成活性氧的产生（P4502E1）和提高抗氧化酶活性的途径防止酒精性肝损伤。4、肝损伤最突出的结果的是向血液中释放胞内酶,因此血清ALT和AST以及ADH和CYP2E1可以作为衡量肝状态的指标。第3页，共14页，星期日，2025年，2月5日背景及意义（二）酒精在肝脏中的代谢及诱导肝损伤途径适量酒量乙醛乙酸CO2+H2O乙醇脱氢酶过氧化氢酶细胞色素氧化酶乙醛脱氢酶过量酒量诱导细胞色素氧化酶过表达(CYP2E1)产生大量ROS，引起氧化应激反应。炎症肝损伤第4页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究创新点1、ZnSO4和LBP均对酒精肝有强烈的抑制和帮助恢复作用，但当前研究仅停留在对单一成分作用效果的研究，而鲜有其复配效果的研究，因此我们将其进行复配来研究其对肝损伤的保护是否具有协同作用。2、本实验对复配之后的药剂在体内酶活性影响层面上进行研究，深层次地揭示了其作用机理。第5页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究内容（一）DPPH自由基清除能力的测定对自由基诱导蛋白氧化损伤的保护作用LBP/ZnSO4体外抗氧化活性协同作用的评价。对自由基诱导脂质氧化损伤的保护作用 协同作用检测第6页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究内容（一）注：1、DPPH自由基清除能力的测定2、对自由基诱导蛋白氧化损伤的保护作用 1)实验试剂配制 2)对Cu2+/H2O2诱导蛋白羰基化的保护作用 3、对自由基诱导脂质氧化损伤的保护作用 1)实验试剂配制 2)羟自由基诱导亚油酸氧化反应体系的建立 3)TBA法 4、协同作用的检测CDI（曹臻1989万等，2008）的计算公式如下：CDI=AB/（A×B）。AB是组合团队比毒素对照组的相应的参数，A或B为单剂组比毒素对照组的相应参数参数的比例。因此，CDI值小于，等于或大于1表明，该药物是协同，相加或拮抗，。CDI小于0.7表明，该药物是显着的协同作用第7页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究内容（二）LBP、ZnSO4对小鼠酒精性肝损伤的协同保护作用（从酶活性变化的角度）动物实验(酶活)ALT、AST（血清）MDA、SOD、GSH-Px（肝匀浆）酒精性肝损伤大鼠肝脏TNF-α和IL1-β表达的测定酒精性肝损伤大鼠肝脏CYP2E1表达的变化肝组织固定、切片、染色（HE染色）协同作用第8页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究方法与技术路线1、实验大鼠的喂养与药剂灌胃⑴36只雄性大鼠250-280克，在22±1℃，湿度:59%一61%，每天光照与黑暗时间各为12h，适应性喂养7天。适应过程中，给予大鼠水和的标准实验室食品（大鼠饲料）自由采食。⑵分组设置①模型对照组②空白对照组（同剂量生理盐水）③ZnSO4+LBP组（24mg/kg+500mg/kg）④单一ZnSO4组（24mg/kg）⑤单一枸杞多糖组（LBP500mg/kg）⑥ZnSO4+LBP组（12mg/kg+250mg/kg）灌胃次数1次/天，酒精剂量为1ml/100g。第9页，共14页，星期日，2025年，2月5日研究方法与技术路线2、实验指标观察与测定⑴病理学观察肝组织固定、切片、染色，HE染色后于光学显微镜下观察肝组织病理学改变。（预测5周末，会产生肝细胞脂肪变部分大鼠肝小叶中心带肝细胞中出现大小不等的脂肪滴，肝小叶可见点状或灶状坏死以及轻度炎症细胞浸润）。⑵血清肝功能生化指标测定甘油三酯（TG）、丙氨酸氨基转移酶(alaninea