甘肃波状芽管孢的鉴定及关键基因检测：揭示真菌特性与生物合成机制.docxVIP

甘肃波状芽管孢的鉴定及关键基因检测：揭示真菌特性与生物合成机制

一、引言

1.1研究背景与意义

疯草是豆科棘豆属（Oxytropis）和黄芪属（Astragalus）有毒植物的统称，广泛分布于世界各大洲的草原地区，是危害畜牧业发展的主要毒草之一。在我国，疯草主要分布于西北、华北和东北等地的草原，如内蒙古、宁夏、甘肃、青海、新疆等省份。牲畜长期或过量采食疯草后，会引发慢性中毒，出现以神经症状为主的中毒症状，如共济失调、肌肉震颤、瘫痪等，严重影响牲畜的生长发育、繁殖性能和生产性能，甚至导致死亡，给畜牧业带来巨大的经济损失。据报道，2004年内蒙古阿拉善左旗北部草场发生大面积毒草灾害，1758万亩草场生长有毒草，6.8万余头牲畜中毒，1000多头牲畜死亡，牧民损失惨重。

苦马豆素（swainsonine，SW）作为疯草的主要毒性成分，是一种吲哚里西啶类生物碱。它能够特异性地抑制参与糖蛋白分解的α-甘露糖苷酶溶酶体和高尔基α-甘露糖苷酶Ⅱ，破坏细胞内膜系统，进而影响组织和器官的正常功能。然而，苦马豆素并非只有危害的一面，近年来的研究发现，它在医药领域具有潜在的应用价值。苦马豆素能够刺激生物体产生极强的免疫力，还能促进骨髓增殖，使晚期恶性肿瘤患者在化疗时配合使用，可避免化疗造成的骨髓抑制及嗜中性白细胞减少症。药理试验表明，苦马豆素的抑癌作用可与紫杉醇相媲美，且无毒副作用，在杀死癌细胞的同时，对人体免疫系统具有保护作用，这使其成为珍稀濒危药材紫杉醇的潜在替代品。

疯草体内普遍共生着链格孢属波状芽管孢组（Alternariasect.Undifilumspp）内生真菌，研究表明，疯草中的苦马豆素主要由该类真菌产生。甘肃波状芽管孢（AlternariaSectionUndifilumgansuense）是从直立黄芪中分离出的产苦马豆素真菌，对其进行深入研究具有重要意义。一方面，有助于深入了解苦马豆素的生物合成机制，为进一步控制疯草内生真菌在植物中的生长繁殖或毒素的产生提供理论依据，从而降低或消除疯草的毒性，从根本上解决家畜疯草中毒问题；另一方面，对甘肃波状芽管孢的研究也有助于挖掘其潜在的应用价值，如利用其产苦马豆素的特性开发新型药物或生物制剂，实现对疯草资源的有效利用。

1.2国内外研究现状

疯草的分布十分广泛，在全球范围内，主要分布于北美洲、南美洲、亚洲、欧洲和非洲的草原地区。在我国，除了前面提到的西北、华北和东北地区，在西南地区的部分草原也有发现。不同地区的疯草种类和分布情况有所差异，例如在内蒙古草原，小花棘豆和变异黄芪是主要的疯草种类；而在青藏高原地区，黄花棘豆则较为常见。

对于苦马豆素的研究，国内外学者在其来源、药理作用及检测方法等方面取得了一定进展。在来源方面，明确了疯草内生真菌是苦马豆素的主要产生者。在药理作用研究上，除了发现其具有抑制肿瘤、增强免疫和抗辐射作用外，还对其作用机制进行了深入探讨，发现苦马豆素通过影响细胞内的糖蛋白代谢，干扰癌细胞的生长和转移。在检测方法上，从传统的化学检测方法逐渐发展到现代的仪器分析方法，如高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）、超高效液相色谱-串联质谱法（ULPC-MS）等，这些方法提高了检测的灵敏度和准确性。

关于波状芽管孢组真菌的研究，目前主要集中在其分类鉴定、与宿主植物的相互关系以及苦马豆素的合成机制等方面。在分类鉴定上，主要依据形态特征和分子生物学方法，如基于内部转录间隔区（ITS）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GPD）等基因序列构建系统发育树来确定其种属关系。在与宿主植物的相互关系研究中，发现波状芽管孢组真菌与疯草形成了共生关系，真菌从宿主植物获取营养物质，同时产生苦马豆素影响宿主植物的生长和防御机制。在苦马豆素合成机制研究方面，虽然已经克隆了一些与苦马豆素合成相关的基因，如β-酮脂酰合酶（β-ketoacylsynthase，KS）基因等，但对于整个合成途径和调控机制仍不完全清楚。

然而，对于甘肃波状芽管孢的研究还相对较少。目前对其生物学特性、遗传多样性以及在不同环境条件下的生长和产毒规律等方面的了解还十分有限。在其与其他波状芽管孢组真菌的进化关系以及与宿主植物直立黄芪的相互作用机制等方面的研究也有待进一步深入。

1.3研究目标与内容

本研究旨在对甘肃波状芽管孢进行准确鉴定，并检测波状芽管孢真菌中与苦马豆素合成相关的LAAO、KS基因，为深入了解甘肃波状芽管孢的生物学特性和苦马豆素的合成机制提供基础数据。具体研究内容如下：

甘肃波状芽管孢的分离与鉴定：从直立黄芪植物组织中分离真菌，通过形态学观察和分子生物学方法，如PCR扩增内部转录间隔区（ITS）、甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GPD）等基因