菌种培养基制备指南.pptxVIP

任务二菌种的分离培养

三、原种和栽培种的分离与培育在获得母种后，下一步要进行原种和栽培种的生产，主要过程包括培养基制作、培养基灭菌、母种接种、培养获得原种和栽培种。

(一)培养基的配方及制作原种和栽培种生产，常用的培养基有棉籽壳培养基、木屑麸皮培养基、麦粒菌种培养基和种木培养基。棉籽壳培养基麦粒培养基木屑培养基

1.棉子壳培养基★配方：（1）棉子壳88%，麸皮或米糠10%，石膏1%，过磷酸钙1%。（2）棉子壳93%，麸皮或米糠5%，石膏1%，过磷酸钙1%。★配制步骤：（1）选用无霉味、新鲜干燥的棉子壳，称取各种原料混合，每千克料加水120～130kg，水中加多菌灵或高锰酸钾，按水重的千分之一计算。（2）充分拌匀，使料中水分含量在65％～70％，可用手紧捏培养料，指缝间有水渗出为宜。也可在水中加消毒剂石灰，按水质量的1％添加，石灰可使培养料pH偏高，有利于抑制杂菌生长，经平菇生长过程产酸以后，正好为平菇生长所需的pH。料中加入高锰酸钾、多菌灵、石灰，都可以使料中杂菌不易生长繁殖。

2.木屑麸皮培养基★配方：木屑（阔叶树种）47%，棉子壳35%，麸皮（或米糠）15%，糖1%，石膏1%，过磷酸钙1%。★配制步骤：按配方称取原料，先将糖溶解于适量水中，其他原料进行混合，然后加入糖水拌匀，使料含水量达60%～65%(每千克料加水120kg～130kg)。简便检查含水量的方法，是用手取一把培养料紧握，以指缝间有水纹但不滴下为适度。

3.麦粒菌种培养基★配方（1）小麦粒1000g，石膏粉20g。（2）小麦粒1000g，石膏粉12g，碳酸钙3g。★配制步骤：(1)将麦粒倒入盛有2%～3%的石灰水（pH≥9）上清液中浸泡。浸泡至麦粒变软，从石灰水中捞出麦粒在草席等物上摊晾。(2)重新浸入2%～3%的石灰水中，一般12小时左右(20℃水温)。(3)将麦粒捞出后装入蒸笼，用热蒸汽在100℃下蒸1小时或放入锅中加水煮沸20～25min，以煮至捏开麦粒时里面没有“白心”为度。(4)麦粒蒸后稍加摊晾，除去表面多余水分。(5)将摊晾后的麦粒加入称好的石膏及碳酸钙,使之与麦粒充分混匀。

4.粪草培养基★配方：粪草90kg，麸皮或米糠8kg，白糖1kg，碳酸钙1kg。★配制步骤：将干牛粪与稻草(麦草)以6∶4之比，堆积发酵15～20天，在这过程中要翻堆2～3次，然后挑出半腐熟的稻草，切成2～3cm长，晒干即为粪草备用。制培养基时，按比例取粪草与其他辅料混匀，用糖水拌料，含水量约60%。

5.种木培养基★配方：种木(木块、三角木、枝条)1000g，木屑100g，米糠50g，水150～200mL。★配制步骤：制作木块菌种时，先将种木锯成木条，再用刀切成楔形木块，或将种木横锯成1.2～1.5cm厚的木片，风干后备用。配制时先将准备好的种木浸入蔗糖或淘米水中24小时，使其充分吸足水后捞出。同时将木屑、米糠等原料拌和，调节含水量达60%左右，然后取出三分之二与种木拌和均匀即可装瓶。而另三分之一可留下，覆在种木培养基的上方，以填补种木间的空隙。

（二）灭菌培养基制好后，采用湿热灭菌的方法，杀死培养料内杂菌及孢子。128℃，1.5kg/cm2，棉籽壳、木屑一般60分钟；麦粒、粪草、原木等90分钟。常压灭菌98～100℃，一般8～12小时。

（三）接种灭菌后的瓶装培养基，在无菌室或接种箱内及时进行接种，每个母种斜面试管，可接种5～8瓶原种，将母种菌丝块放入原种培养基瓶后，塞上棉塞，置于25℃的温室内培养，约经20天左右，菌丝长满全瓶就可作栽培种接种之用。

（四）栽培种生产原种转接到栽培种培养基上进行扩大培养，获得栽培种。一瓶原种可接40瓶栽培种。具体制法是：在接种箱中将原种瓶用5%的来苏儿擦洗瓶壁，然后用消毒的镊子从原种瓶中夹取1小块菌种，放在栽培瓶料中央，塞上棉塞，置于培养室内（25℃）培养30天，菌丝发满瓶，无杂菌污染，即可做栽培种使用。

原种

栽培种