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《动物疫病检验技术》

凝集试验概述

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凝集试验概述

凝集反应是血清学试验的一大类，是细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶颗粒性裁体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合，在有适当电解质存在下，经过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集反应。参与凝集试验的抗体主要为IgG和IgM。凝集试验可用于检测抗体或抗原．最突出的优点是操作简便．便于基层诊断工作应用。

那凝集反应是如何出现的呢？接下来我们来看下凝集反应的一般原理通常，细菌和红细胞等颗粒性抗原在悬液中带弱负电荷，周围吸引一层与之牢固结合的正离子，外面又排列一层松散的负离子层，构成一个双离子层，使颗粒相互排斥。在有电介质存在的条件下，当特异抗体与相应抗原颗粒互补结合时，抗体的交联作用克服了抗原颗粒表面的电位，而使颗粒凝集在一起。

凝集反应的发生分两阶段：第一阶段：抗原抗体的特异结合。第二阶段：在电解质的参与下，出现可见的凝集颗粒。

那凝集反应有怎样的用途呢？凝集反应的用途主要有：可用于定性的检测，即根据凝集现象的出现与否判定结果阳性或阴性;可进行定量检测，即将标本作一系列倍比稀释后进行反应，以出现阳性反应的最高稀释度作为滴度进行定量检测。

接下来我们来看看凝集反应的种类，凝集反应可根据抗原的性质、反应的方式分为直接凝集反应(简称凝集反应)和间接凝集反应。

第一大类：直接凝集反应

颗粒性抗原与相应抗体直接结合并出现凝集现象的试验称为直接凝集反应。参与反应的抗体称为凝集素。细菌、螺旋体、立克次体等微生物与其相应的抗体、红细胞与其抗体发生反应均可形成凝集。按操作方法可分玻片法和试管法两种。

第一种：玻片法

玻片法为一种定性试验。将含有已知抗体的诊断血清(适当稀释)与待检菌悬液各一滴在玻片上混合，数分钟后，如出现颗粒状或絮状凝集．即为阳性反应。此法简便快速，适用于新分离细菌的鉴定或分型。如沙门氏菌的鉴定、血型的鉴定等多采用此法。也可用已知的诊断抗原悬液，检测待检血清中是否存在相应抗体，如布氏杆菌的玻板凝集反应和鸡白痢全血平板凝集试验等。

第二种：试管法

试管法为一种定量试验，用以检测待测血清中是否存在相应抗体和测定该抗体的效价(滴度)，可做临床诊断或流行病学调查。操作时，将待检血清用生理盐水做倍比稀释．然后加入等量抗原，置37℃水浴数小时观察。视不同凝集程度记录为“++++”(100％凝集)、“+++”(75％凝集)、“++”(50％凝集)、“+(25％凝集)和“-”(不凝集)。以出现50％凝集(++)以上的盯清最大稀释度为该血清的凝集效价。

细菌凝集视参与反应的细菌结构不同而有菌体(o)凝集、鞭毛(H)凝集和vi凝集之分（表面抗原），菌体凝集时菌体彼此吸着，形成致密的颗粒状凝集。鞭毛凝集通常用活菌或经福尔马林处理后的菌体进行，呈疏松的絮状凝集。表面抗原凝集须在冰箱中放置20h才能进行完全，凝集亦较致密。

反应条件视抗原种类不同略有差异．肠道细菌的鞭毛抗原通常用52℃水浴2h．布氏杆菌凝集反应有时用37℃，24h断定结果。为了避免在高温中放置过久而招致杂菌生长．可在稀释液中加适量防腐剂．如在生理盐水中加0.5％石炭酸。

某些细菌(如R型细菌)在制成细菌悬液时很不稳定，在没有特异性抗体存在的条件下，亦可发生凝集，称谓自家凝集。此外．某些理化因素亦可引起非特异性凝集。pH值降至3.0以下时，即可引起抗原悬液的自凝，称为酸凝集。因此，试验时必须设置阳性血清、阴性血清和生理盐水等对照。

含有共同抗原的细菌，相互之间可以发生交叉凝集，又称类属凝集。但交叉凝集的凝集价一般比特异性凝集低，不难区别。抗血清中的类属凝集素可用凝集素吸收的方法将其除去。例如甲、乙两细菌，甲细菌含有AB两种抗原，乙细菌含有BC抗原。因含有共同抗原B，故两者能发生交叉凝集。如在抗甲细菌的抗血清中加入乙细菌悬液．则血清中B凝集素被吸收，该吸收后的血清仍能与甲细菌凝集，但不能凝集乙细菌。此法不仅可用以鉴别特异性凝集和类属凝集，也可用以提取含单一凝集素的因子血清。

另外，还有生长凝集试验，抗体与活的细菌结合，如果没有补体存在，就不能杀死或抑制细菌生长，但能使细菌呈凝集状生长，可借显微镜检查观察培养物是否凝集成团，以检测加入培养基中的血清是否含有相应抗体。猪气喘病的微粒凝集试验就是应用了这个原理。将待检血清加入接种有猪肺炎霉形体的培养基中，培养24—48h，离心沉淀，取沉淀物做涂片，染色镜检。如发现霉形体聚集成团即为阳性。微粒凝集试验可用于检出带菌猪。

在某些肠道传染病的快速检验中，曾应用免疫荧光菌球试验，其本质也是一种玻板快速生长凝集试验。如霍乱孤菌的检查，将相应荧光抗体用选择培养液稀释至事先确