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平板划线法挑单菌落筛选复壮菌种

摘要：在发酵生产中，旺盛的菌种活力是生产正常进行的前提保证，菌种长期储存或多次的

传代，其活力都会下降，即所谓的菌种衰退。衰退的菌种投入生产会降低发酵的产率，因此

菌种的复壮就成为必然的选择。

关键词：菌种活力，菌种衰退，菌种复壮

菌种活力：菌种繁殖和代谢的速度

菌种退化：是指群体中退化个体在数量上占一定比例后，所表现出群体性能变差的现象。因

此，在已经退化的群体中，仍然有一定数量尚未退化的个体

菌种复壮：狭义的复壮是一消极措施，一般指对已衰退的菌种进行纯种分离和选择性培养，

使其中未衰退的个体获得大量繁殖，重新成为纯种群体的措施。广义的复壮是一积极的措施，

即在菌种的生产性状未衰退前就不断进行纯种分离和生产性状测定，以在群体中获得生产性

状更好的自发突变株。

在待复壮菌种的细胞群中，一般存在着仍保持原有典型形状或优于原有性状的个体。通

过纯种分离法，设法把这种细胞挑选出来即可达到复壮的效果。纯种分离方法很多，大体可

分为两类，一类较粗放，可达到菌落纯水平)有平板表面涂布法，平板划线分离法，琼脂培

养基浇注法;另一类较精细，可达到菌株纯的水平，有“分离小室”进行单细胞分离，显微

操纵器进行单细胞分离，菌丝尖端切割法进行单细胞分离等。

平板划线分离法挑取单菌落复壮菌种，属于“菌落纯水平”，在实验室简单易行。

材料：试管斜面菌种，培养基琼脂平板，培养基摇瓶，拟生产发酵培养基等

仪器：冰箱、超净台、培养箱、摇床、5L发酵罐系统，分光光度计等

操作：1、斜面菌种从冰箱取出，置超净台室温活化30min

2、在酒精灯的火焰下，用接种环用试管斜面沾取少量菌落在平板培养基表面轻轻划

线（以不划破琼脂为度），划线方式主要如图在琼脂表面轻轻划第1区的三条线（注意接

种环与平板表面成20°~30°角），将培养皿转动90°，烧接种环，连着1区第三条线1-c划

第二区的2-a，然后单划2-b、2-c，再将培养皿转90°，烧接种环，连着2-c划第3区的3-a，

然后单独划3-b、3-c；如此操作划线多个培养皿平板③培养皿平板培养一定时间后，挑取

多个形态良好的单菌落转接于试管斜面，编号，进行扩增培养。

1

a

b

c

2

ca

bb

ac

3

3、扩增培养好的各试管斜面，再接种于多个摇瓶培养基培养，摇瓶培养中定

时取样测定培养液的OD值，作生长曲线。

4、根据摇瓶培养的生长曲线，选择菌种活力好的几个试管斜面进行发酵罐生

产小试3-5次，最终根据小试的得率选择目标菌种。