感染性疾病的分子诊断讲课文档.pptVIP

感染性疾病的分子诊断;感染的慨念;感染性疾病：由某种病原体所致，通过不同方式引起人体发生感染并出现临床症状的疾病。

病原体：病毒、细菌、原虫、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体、寄生虫

。

;常规检测方法：

免疫学方法

微生物学方法

受敏感性、特异性限制，不易早期诊断，并且不易提供病原体分型及耐药性方面的信息。;感染性疾病的分子诊断策略;感染性疾病分子诊断标志物;二、感染性疾病分子诊断的常用方法;;nucleicacidsequence-basedamplification(NASBA);NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。;;nucleicacidsequence-basedamplification(NASBA);NASBA的特点为操作简便，不需特殊仪器，不需温度循环。整个反应过程由三种酶控制，循环次数少，忠实性高,其扩增效率高于PCR，特异性好。;三、感染性疾病分子诊断的标本处理;四、感染性疾病分子诊断的结果解释;3.定性检测结果有时不能提供病原体活力相关信息

临床治疗病情缓解后一定时间内，在患者样本中仍可以检测出相应的病原体。

有些病原体潜伏在进体内，没有临床症状。

4.疾病状况的判断检测出病原体的存在并不能说此病原体就是引起疾病的直接原因。

该病原体可能是一种正常菌群

;五、感染性疾病分子诊断的临床应用及评价;第一节病毒的基因检测;我国是HBV高流行区，50%－70%的人受过感染，8%－10%是HBV携带者，肝炎患者中60%是慢性肝炎患者，导致肝硬变，HBV又与原发性肝癌密切相关。

外壳（HBsAg):外壳蛋白成分为表面抗原

核心（HBcAg)：DNA

DNA聚合酶

HBcAg;Dane颗粒（完整的病毒）形态;（一）病毒基因组结构;pre-s1;HBV基因分型;HBV在肝细胞内的复制;（二）分子诊断;第二十六页，共88页。;有时为了证实扩增产物的特异性，对扩增产物进行以下分析：

RLFP

斑点杂交

Southern杂交

;2.支链DNA信号放大技术(bDNA）;捕获探针固化在微孔板上

靶探针1分别与捕获探针及待测核酸杂交

靶探针2分别与待测核酸及bDNA杂交

形成复合物：;;信号检测：bDNA可结合很多酶标探针，酶催化底物（1,2-二恶二酮，dioxetane）发光，使核酸信号放大，且发光强度与DNA量成正比。

优点：放大倍数确定

阳性检出率高

稳定性和可重复性好

操作简便，省时，易于普及;3.基因芯片技术

标本经PCR扩增后与芯片上的特异探针进行杂交，可以检测：

是否有病毒感染

感染病毒的种类及亚型

病毒的耐药情况

特点：可同时进行大量标本的检测;近年来陆续上市的核苷(酸)类似物对HBV的治疗压力集中在P区。;YMDD

(酪氨酸-蛋氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸);HBV耐药检测（YMDD突变检测方法）;YMDD突变检测方法;（三）临床意义;2.监测治疗效果:

HBVDNA107拷贝/ml提示病毒复制活跃；

HBVDNA＜104拷贝/ml治疗有一定疗效；

HBVDNA＜103拷贝/ml、HBeAg阴转、转氨酶正常为乙型肝炎临床治愈指标；

3.判断病情，指导制定合理的治疗方案;

4.病毒耐药性的检测

乙肝病毒DNA聚合酶YMDD处的突变是病毒产生耐药性的重要原因，通过监测YMDD的突变情况，可以获得病毒耐药性方面的信息，指导抗病毒治疗。;二、流行性感冒病毒

流行性感冒病毒(Influenzavirus)，是引起流行性感冒的病原体;

分为甲(A)、乙(B)和丙(C)3个型别;

根据病毒颗粒表面血凝素(Haemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuramiridase，NA)的抗原性，甲型流感病毒又可分为不同的亚型。

甲型流感病毒易发生变异，致病力强，1918年发生在西方国家的大流感杀死了几千万人，即是由甲型流感病毒引起。;第四十一页，共88页。;（一）流感病毒基因组结构

单链RNA病毒，RNA为负链；

有8个RNA片段或7个RNA片段；

所有RNA片段5’末端和3’末端高度保守；

两种不同亚型病毒感染宿主时，会生成基