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小鼠杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的N-糖基化修饰：结构、功能与调控机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在生物医学领域，小鼠杂交瘤细胞分泌单克隆抗体展现出了无可替代的价值，已然成为了疾病诊断、治疗以及基础研究等诸多方面的关键工具。1975年，科学家Kohler和Milstein成功研发出单克隆抗体技术，通过细胞融合将小鼠骨髓瘤细胞与经抗原免疫后的B淋巴细胞融合，创造出能够持续分泌特异性抗体的杂交瘤细胞，开启了生物医学研究的新纪元。单克隆抗体凭借其高度特异性，能够精准识别并结合目标抗原，这一特性使其在疾病诊断中发挥着重要作用，极大地提高了诊断的准确性和灵敏度。在肿瘤诊断方面，针对肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原的单克隆抗体，可用于肿瘤的早期筛查、分型以及病情监测。如甲胎蛋白（AFP）单克隆抗体在肝癌诊断中，能够通过检测血液中AFP的含量，为肝癌的早期发现提供重要依据。在疾病治疗领域，单克隆抗体药物已成为肿瘤、自身免疫性疾病等重大疾病治疗的有力武器。以肿瘤治疗为例，利妥昔单抗（美罗华）作为一种用于治疗淋巴瘤的小鼠单克隆抗体药物，能够特异性地结合肿瘤细胞表面的抗原，触发机体的免疫反应，从而达到杀伤肿瘤细胞的目的，显著改善了患者的治疗效果和生存质量。在基础研究中，单克隆抗体作为研究工具，广泛应用于蛋白质纯化、细胞信号传导研究等领域，帮助科研人员深入探索生命现象的本质和规律。

N-糖基化修饰作为一种重要的蛋白质翻译后修饰方式，对单克隆抗体的结构、功能以及药代动力学性质都有着深远的影响。单克隆抗体的糖基化修饰多数为N-连接的聚糖，IgG型单克隆抗体一般在Fc段的Asn-297有一个保守的N糖基化位点，另外约20%的IgG在Fab区域存在另一个N-连接的糖基化位点，且两条重链的糖基化程度多数情况下并不对称，这进一步增加了糖基化抗体的多样性。Fc聚糖分子的核心结构由3个甘露糖（Man）和2个N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）分子组成复杂的“双触角型”五糖分子结构，不同糖型还可含有岩藻糖（Fuc）、半乳糖（Gal）、唾液酸（Sia）等其他分子，糖链长度、分叉方式和单糖排列顺序的差异造就了N-聚糖复杂多变的结构。

N-糖基化修饰对单克隆抗体的重要性不言而喻。单抗Fc段的糖基化水平能够影响抗体依赖的细胞毒作用（ADCC）和补体依赖的细胞毒作用（CDC），改变抗体的药代动力学性质，部分糖型结构甚至还会影响抗体的免疫原性。研究发现，降低/去除核心糖结构中的岩藻糖可以显著提高ADCC效应，由Lec13突变株表达的岩藻糖敲除的IgG抗体，其与FcγRIIIa结合能力提高了50倍，ADCC效应提高了100倍。末端半乳糖含量的增加可以提高CDC效应，采用糖苷酶处理去除半乳糖基则会减少补体的溶解活性。唾液酸修饰类型及含量也会对抗体产生影响，人体内IgG的唾液酸类型为N-乙酰基神经氨酸（Neu5Ac，NANA），而采用哺乳动物细胞（如CHO细胞）表达制备的单克隆抗体，经常带有非人的唾液酸N-羟乙基神经氨酸（Neu5Gc，NGNA）修饰，带有NGNA的单克隆抗体可能在人体中引发免疫原性，且唾液酸含量越高，IgG与Fc受体的亲和力越低，导致ADCC活性降低，与细胞表面的抗原结合也会减弱。

深入研究小鼠杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的N-糖基化修饰具有重大的理论和实际意义。从理论层面来看，这有助于我们更深入地理解单克隆抗体的结构与功能之间的关系，揭示N-糖基化修饰在抗体生物学活性调控中的分子机制，为抗体工程的发展提供坚实的理论基础。从实际应用角度出发，对N-糖基化修饰的研究能够为单克隆抗体药物的研发、生产以及质量控制提供关键的技术支持。通过优化糖基化修饰，可以提高单克隆抗体药物的疗效、降低免疫原性，从而提升药物的安全性和有效性，为患者带来更好的治疗效果。

1.2国内外研究现状

国内外众多科研团队和研究机构围绕小鼠杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的N-糖基化修饰展开了广泛而深入的研究。在N-糖基化修饰的结构与功能研究方面，已明确单克隆抗体糖基化修饰多数为N-连接的聚糖，且IgG型单克隆抗体在Fc段Asn-297的保守N糖基化位点以及约20%在Fab区域的另一个N-连接糖基化位点。对Fc聚糖分子核心结构及不同糖型所含其他分子的研究也较为透彻，知晓糖链长度、分叉方式和单糖排列顺序差异造成N-聚糖结构的复杂性。同时，大量研究揭示了N-糖基化修饰对单克隆抗体功能的影响，如核心岩藻糖、半乳糖和末端唾液酸等糖型结构对ADCC、CDC效应以及药代动