植物组织培养培养基制备.pptxVIP

上海农林职业技术学院（上海市农业学校）植物科学技术系;项目三培养基制备;任务6培养基配制;【能力目标】

能根据不同的植物和培养目的配制不同的培养基及选择不同的激素水平

掌握培养基的筛选方法

【情感目标】

培养学生任务执行力，规范操作、注意安全

具有科学严谨、实事求是的工作态度

具有团队合作交流意识和生态环保意识。;一、培养基的类型与特点

1、培养基的种类

根据态相不同，培养基分为固体培养基和液体培养基。其区别在于培养基中是否添加了凝固剂。

;根据营养水平不同，分为基本培养基和完全培养基。

基本培养基就是MS、White培养基。

完全培养基由基本培养基添加适宜的激素和有机附加物组成。;2、培养基的特点

根据培养基的成分不同，有MS、B5、White、H、Nitsch、Miller、N6、SH、LS（详见教材）等培养基。

;1）MS培养基

无机盐类离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其中钾盐、铵盐和硝酸盐含量较高。

广泛用于植物的器官、花药、细胞核原生质体培养。;2）White培养基

无机盐类浓度较低的培养基。

特别适合于生根培养和幼根胚培养。;

3）N6培养基

1974年由我国学者朱至清等为水稻等禾谷类作物花药培养而设计。

特点是KNO3和(NH4)2SO4含量较高，不含钼。;4）B5培养基

含有较低的铵盐，较高的硝酸盐和盐酸硫胺素。

在豆科植物中用得较多，也适用于木本植物。;;;;;1）蔗糖、琼脂的称取

例：求3%蔗糖和0.5%琼脂的称取量？

“3%和0.5%”的含义：表示在1L培养基中蔗糖的含量占3%，琼脂的含量占0.5%。

大家试着计算一下！

;解析：

蔗糖=1L×3%=1000ml×0.03=30g

琼脂=1L×0.5%=1000ml×0.005=5g;2）计算母液的吸取量

母液吸取量（ml）=

;例：配制1L培养基，需GaCl2·2H2O的10倍母液中吸取多少毫升？

大家根据公式做一下！

;解析：

母液吸取量（ml）==100ml

;3）计算激素母液的吸取量

激素吸取量

=×培养基体积;例：若配方激素NAA浓度为1mg/L，激素母液为0.1mg/mlNAA，求配制1L培养基需要激素母液吸取量？

大家根据公式做一下！

;解析：

吸取量=（配方浓度/母液浓度）×培养基体积

=（1mg/L/0.1mg/ml）×1L

=10ml;4）培养基配制操作步骤（以1L为例）

(1)分配水量：

500ml蒸馏水定容母液+500ml蒸馏水溶解糖与琼脂。

;(2)移取母液与溶解糖和琼脂

①用对应的移液管分别量取母液，移至500ml的量筒内，最后加蒸馏水定容到500ml刻度线；

;②用托盘天平分别称取蔗糖和琼脂，然后将蔗糖直接倒入锅内，加500ml蒸馏水加热溶解，将琼脂趁热倒入锅内，用玻璃棒搅拌直至完全溶解为止。后关闭电炉。;(3)将混合的母液倒入锅内与糖和琼脂混合均匀，测定培养基的pH值为6左右，过酸用1mol/LNaOH和过碱用1mol/LHCL调整。;(4)分装

每培养瓶50ml左右（一般占培养瓶1/3左右）。

;(5)标记与清理

标明培养基代号、操作人、时间、瓶数即可灭菌。

用具清理和洗涤：各种母液按原位置摆放整齐，用过的量筒、移液管、烧杯、锅子等用蒸馏水洗涤干净，然后放回原处。

;(6)灭菌

按照容量计算灭菌时间

(7)操作注意事项

;;;2、培养基的消毒灭菌

（1）培养基灭菌的意义

培养基在制备过程中常带有杂菌，培养基配置完毕和分装后需在24h内完成。

;（2）培养基常用灭菌方法

1）高压蒸汽灭菌：