miR-21表达上调对HT-29细胞生物学行为及放化疗敏感性的影响探究.docxVIP

miR-21表达上调对HT-29细胞生物学行为及放化疗敏感性的影响探究

一、引言

1.1研究背景与意义

结直肠癌（ColorectalCancer，CRC）是消化系统常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内，其发病率和死亡率均位居前列。根据世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据，结直肠癌新发病例数达193万，死亡病例数为93.5万，分别位列全球癌症发病和死亡的第三位和第二位。在我国，随着经济发展、生活方式改变以及人口老龄化加剧，结直肠癌的发病率也呈逐年上升趋势，严重威胁着人们的生命健康和生活质量。

目前，结直肠癌的治疗主要包括手术、化疗、放疗以及靶向治疗等综合手段。手术切除是早期结直肠癌的主要治疗方法，但对于中晚期患者，单纯手术治疗效果往往不佳，常需要结合化疗和放疗。5-氟尿嘧啶（5-FU）作为一种经典的化疗药物，广泛应用于结直肠癌的化疗方案中，通过抑制胸苷酸合成酶，干扰DNA合成，从而发挥抗肿瘤作用。放疗则是利用高能射线杀死癌细胞，也是中晚期结直肠癌综合治疗的重要组成部分。然而，肿瘤细胞对化疗药物和放疗的敏感性存在差异，部分患者会出现耐药现象，导致治疗效果不理想，复发率高，5年生存率较低。因此，深入研究结直肠癌的发病机制，寻找新的治疗靶点，提高肿瘤细胞对化疗和放疗的敏感性，对于改善结直肠癌患者的预后具有重要意义。

微小RNA（MicroRNA，miRNA）是一类内源性非编码小分子RNA，长度约为18-25个核苷酸。miRNA通过与靶mRNA的3’-非翻译区（3’-UTR）互补配对，抑制mRNA的翻译过程或促使其降解，从而在转录后水平调控基因表达。大量研究表明，miRNA参与了细胞的增殖、分化、凋亡、侵袭和转移等多种生物学过程，在肿瘤的发生、发展、诊断、治疗及预后评估中发挥着重要作用。其中，miR-21是目前研究较为广泛的一种miRNA，在多种肿瘤组织和细胞系中呈高表达，如乳腺癌、肺癌、肝癌、结直肠癌等。在结直肠癌中，miR-21的表达水平明显高于正常组织，且与肿瘤的分期、转移及预后密切相关。研究发现，miR-21可以通过调控多个靶基因，如磷酸酶和张力蛋白同源物（PTEN）、程序性细胞死亡4（PDCD4）等，参与结直肠癌的发生发展过程。然而，miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的具体影响机制，以及其在调节结直肠癌细胞对5-FU和放疗敏感性方面的作用尚不完全清楚。

本研究旨在通过上调结直肠癌细胞系HT-29中miR-21的表达，探讨其对细胞生物学行为，如增殖、凋亡、周期、侵袭等的影响，并进一步研究miR-21对HT-29细胞对5-FU化疗和放疗敏感性的影响，为揭示结直肠癌的发病机制及寻找新的治疗靶点提供理论依据和实验基础。

1.2研究目的

本研究旨在深入探究上调miR-21对HT-29细胞生物学行为的影响，以及对5-FU和放疗敏感性的改变，具体研究目标如下：

构建稳定上调miR-21表达的HT-29细胞模型，通过转染pre-miR-21慢病毒载体，实现HT-29细胞中miR-21的过表达。

运用多种实验技术，如CCK-8法、流式细胞术、细胞克隆形成实验、Transwell小室法等，系统研究上调miR-21对HT-29细胞增殖、凋亡、周期分布和侵袭能力等生物学行为的影响。

采用CCK-8法检测上调miR-21后HT-29细胞对5-FU化疗敏感性的变化，并计算半数抑制率（IC50）；利用MTT法检测细胞对放疗敏感性的改变，明确miR-21在调节HT-29细胞对5-FU和放疗敏感性中的作用。

初步探讨miR-21影响HT-29细胞生物学行为及对5-FU和放疗敏感性的潜在分子机制，为结直肠癌的治疗提供新的靶点和理论依据。

1.3国内外研究现状

近年来，miR-21与肿瘤的关系成为国内外研究的热点。在国外，大量研究已证实miR-21在多种肿瘤中发挥关键作用。例如，在乳腺癌研究中，通过基因芯片技术和实时定量PCR检测发现，miR-21在乳腺癌组织中显著高表达，且其表达水平与肿瘤的恶性程度和预后相关。进一步研究表明，miR-21可通过靶向抑制PTEN基因，激活PI3K/AKT信号通路，促进乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。在肺癌研究中，利用RNA干扰技术沉默miR-21的表达后，肺癌细胞的增殖能力明显减弱，凋亡增加，同时对化疗药物的敏感