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RAPD及SSR技术解析HFJ与MIJ近交系大鼠遗传密码：差异、多样性与应用探索

一、引言

1.1研究背景

近交系大鼠作为一种重要的实验动物模型，在医学、生命科学及农业等领域的研究中发挥着关键作用。因其具备基因纯合性高、同质性强、遗传背景明确以及易于操作等显著特点，被广泛应用于各类实验研究。通过连续20代以上的兄妹交配或亲子交配，近交系大鼠的近交系数能够达到98.6％以上，使得群体基因达到高度纯合和稳定的状态。目前，全世界已成功培育出230多个品系的近交系大鼠，像BN、F344等都是常用的品系。这些近交系大鼠在遗传学、肿瘤学、免疫学等众多学科的发展进程中，发挥了不可或缺的推动作用，已然成为理想的研究模型。例如，在肿瘤学研究中，利用近交系大鼠建立肿瘤模型，能够为肿瘤的发病机制、治疗方法等方面的研究提供有力支持；在免疫学研究中，近交系大鼠可以用于研究免疫系统的功能和疾病的免疫机制。

HFJ和MIJ是我国近年来在实验动物领域备受关注的两个近交系大鼠型号。HFJ近交系大鼠是由河北医科大学实验动物学部培育而成，在肿瘤学、代谢性疾病等研究领域展现出独特的应用价值。有研究表明，HFJ大鼠对大鼠肿瘤细胞Walker-256具有抗性，腹水瘤及实体瘤均不易在其体内生长，这为肿瘤治疗研究提供了新的动物模型。在建立脂肪肝和胰岛素抵抗动物模型的研究中发现，HFJ大鼠在高脂饮食喂养下，体重增长、血脂水平等方面与传统的Wistar大鼠存在差异，这对于探究胰岛素抵抗及脂肪肝的发生机制具有重要意义。MIJ近交系大鼠则是通过全同胞近亲交配方式，采用选优法成功培育出自发雄性不育大鼠近交系。其雄性后代中稳定出现不育个体，经遗传测交实验证实为常染色体上的单一隐性基因突变所致。这一特性使得MIJ近交系大鼠有望成为生殖领域研究的优良动物模型，为深入研究男性不育的遗传机制提供了宝贵的实验材料。

1.2研究目的与意义

本研究旨在借助RAPD（随机扩增多态性DNA分析）和SSR（微卫星）技术，对HFJ和MIJ近交系大鼠的遗传特性展开深入分析。具体而言，利用RAPD技术，通过PCR扩增不同长度的DNA片段，检测其随机扩增的多态性，将扩增出的DNA片段作为分子标记，以此分析DNA序列间的基因差异，进而推测基因多态性程度以及物种间关系。运用SSR技术，根据微卫星序列两端互补序列设计引物，通过PCR反应扩增微卫星片段，由于核心序列串联重复数目不同，能够扩增出不同长度的PCR产物，将扩增产物进行凝胶电泳，根据分离片段的大小决定基因型并计算等位基因频率，从而构建遗传多样性图谱，用于种间关系的比较和物种分类。

深入了解HFJ和MIJ近交系大鼠的遗传特性，对于大鼠品系的优化具有重要指导意义。通过明确其遗传背景和基因多态性，能够在选育过程中有针对性地选择优良性状，剔除不良基因，从而培育出更符合实验需求的大鼠品系。在疾病模型建立方面，准确把握遗传特性可以确保所建立的疾病模型更加稳定和可靠，提高实验结果的准确性和可重复性，为疾病的研究和治疗提供更有效的动物模型。从更广泛的角度来看，本研究的成果不仅能为这两种近交系大鼠的进一步研究和应用奠定坚实基础，还能为其他动物的突变、基因编辑及遗传背景分析提供极具价值的参考和借鉴，推动整个实验动物领域的发展。

1.3研究方法与技术路线

RAPD技术的原理是建立在PCR（聚合酶链反应）基础之上。通常PCR反应所用引物长度约20个核苷酸，而RAPD技术的引物不仅序列短，而且核苷酸的组成和排列是随机的。在PCR反应中，随机引物与基因组的配对位置取决于随机吻合的程度。其基本过程由高温变性、低温退火、适温延伸等几个反应步骤组成一个周期，循环进行，使DNA迅速扩增。首先使被扩增的DNA于高温下解链，作为模板；然后降温，让人工合成的随机寡核苷酸引物在低温条件下与基因组单链DNA上的特定位点随机互相结合；DNA聚合酶在72°C将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，沿模板5-3’方向延伸，合成DNA新链。每一周期所产生的DNA均能作为下一轮反应的模板，所以反应产物的增加呈指数形式，经过30次循环，产物扩增倍数理论值达10?，实际值达10?。利用RAPD技术分析HFJ和MIJ近交系大鼠遗传特性时，首先提取大鼠的基因组DNA，然后选择一系列碱基顺序随机排列的寡聚核苷酸作为引物，进行PCR扩增，最后对扩增产物进行凝胶电泳检测，分析其多态性。

SSR技术中，简单重复序列（SSR）也称微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1-6bp，其中最常见的是双核苷酸重复，即(CA)n和(TG