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病理科病灶切片诊断要点解析

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目录

01

切片制备基础

02

形态学观察原则

03

特殊染色应用

04

免疫组化技术

05

分子病理学方法

06

诊断报告编写

01

切片制备基础

组织固定与取材规范

固定液选择与配比

根据组织类型选择中性缓冲福尔马林或其他专用固定液，确保渗透深度与时间匹配，避免过度固定导致组织硬化或固定不足影响后续染色效果。

取材标准化操作

固定环境控制

遵循“全面、精准、代表性”原则，对病变区域与周围正常组织同步取材，标注方位并控制厚度，确保后续切片能完整反映病灶特征。

保持固定容器密封性及温度稳定，避免组织干燥或微生物污染，特殊标本需采用真空负压固定技术以提高效率。

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切片制作工艺流程

脱水透明浸蜡

梯度酒精脱水后使用二甲苯透明，石蜡浸渍需控制温度与时间平衡，避免组织收缩或蜡块硬度不均导致切片碎裂。

切片厚度与平整度

调整切片机至3-5μm厚度，刀片角度与速度协调，辅以冰台冷却减少褶皱，确保单层细胞结构清晰可见。

防脱片处理

采用多聚赖氨酸或APES胶预处理载玻片，烤片温度分阶段升温至60℃，增强组织黏附性以避免染色过程中脱落。

染色基本原理应用

苏木精-伊红（HE）染色

苏木精染核显蓝色，伊红染胞质显红色，通过酸碱度调节增强对比度，是区分炎症、纤维化与肿瘤的基础染色。

特殊染色技术

如Masson三色染色区分胶原纤维，PAS染色显示糖原与基底膜，需根据目标成分选择氧化剂、染料组合及分化时间。

免疫组化染色原理

利用抗原抗体特异性结合，通过酶标二抗显色定位靶蛋白，需优化抗原修复条件（热修复/酶修复）及封闭步骤降低背景噪音。

02

形态学观察原则

细胞形态特征识别

观察细胞核与胞质的比例是否失衡，恶性肿瘤常表现为核质比显著增高，核染色质浓集或分布不均。

核质比例异常

高倍镜下计数核分裂象数量，异常增多的核分裂象（尤其病理性核分裂）是细胞增殖活跃的重要标志。

核分裂象增多

正常上皮细胞通常呈现极性排列，而癌变细胞可能失去极性，表现为杂乱无章的堆叠或浸润性生长。

细胞极性丧失

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02

包括核大小不一、核膜不规则、核仁肥大或多核仁等，需结合组织学背景判断良恶性。

细胞异型性评估

04

腺癌中可见腺体分支异常、背靠背排列或共壁现象，需与反应性增生或化生鉴别。

通过观察单个细胞或细胞巢突破基底膜向间质浸润，辅以免疫组化标记（如E-cadherin丢失）确认。

肿瘤细胞侵入血管或淋巴管腔时，需注意与人工假象区分，必要时通过CD31/D2-40免疫染色验证。

凝固性坏死、凋亡小体或地图状坏死等不同模式对肿瘤类型（如鳞癌vs淋巴瘤）具有提示意义。

结构异常诊断要点

腺体结构紊乱

间质浸润证据

脉管侵犯识别

坏死模式分析

病变分级标准体系

如Nottingham分级（乳腺浸润性癌）综合评估腺管形成、核多形性和核分裂数，量化评分划分Ⅰ-Ⅲ级。

组织学分级系统

依据核大小、染色质状态及核仁显著性划分（如Fuhrman肾细胞癌分级），高级别核提示预后不良。

结合HER2、ER/PR、Ki-67等分子标记完善分级（如乳腺癌LuminalA/B分型），指导个体化治疗。

核分级标准

黏膜内瘤变采用上皮内瘤变（低/高级别）分级，浸润性癌则按TNM分期评估穿透层次。

侵袭深度分层

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分子分型补充

03

特殊染色应用

常用技术选择依据

组织特性匹配

根据病灶组织的细胞成分、结构特点（如纤维化、黏液分泌等）选择针对性染色技术，例如Masson三色染色适用于胶原纤维与肌纤维的鉴别。

目标物质特异性

针对特定代谢产物或异常沉积物（如淀粉样蛋白、铁离子）选用刚果红染色或普鲁士蓝染色，确保染色结果具有高度特异性。

病理诊断需求

结合临床初步诊断方向，优先选择能明确鉴别良恶性或分型的染色方法，如PAS染色用于糖原贮积病与真菌感染的鉴别。

染色结果解读方法

颜色反应与定位分析

观察染色后组织切片中目标物质的颜色变化及分布位置（如细胞核、胞质或间质），例如HE染色中嗜酸性颗粒的粉红色定位提示颗粒性质。

定量与半定量评估

对染色强度进行分级（如弱、中、强阳性），结合病灶范围评估病理改变程度，如银染显示神经纤维密度分级。

对照样本比对

需设置阳性与阴性对照样本，排除假阳性或假阴性干扰，如免疫组化染色中内源性过氧化物酶的消除验证。

特殊染色辅助鉴别低分化癌与肉瘤（如网状纤维染色显示基底膜结构），或确定转移性肿瘤来源（如甲状腺球蛋白染色）。

适用病理类型分析

肿瘤性病变

针对病原体特性选择染色，如抗酸染色检测结核分枝杆菌，六胺银染色识别肺孢子菌。

感染性疾病

通过特殊染色检测异常物质沉积，如苏丹III染色诊断脂肪变性，刚果红染色确诊淀粉样变性。

代谢与遗传性疾病

04

免疫组化技术

抗体