编制说明-植物源性食品中甜菜碱的测定-高效液相色谱法.docxVIP

《植物源性食品中甜菜碱的测定高效液相色谱法》农业行业标准编制说明

起草单位：农业农村部食物与营养开展研究所负责人：朱大洲

联系：邮箱：zhudazhou@caas.cn

一、工作简况，包括任务来源、协作单位、主要工作过程、标准主要起草人及其所做的工作等；（一）任务来源

根据农质标函（2020）128号农业农村部农产品质量安全监管司关于下达2020年农业国家标准和行业标准制修订工程计划的通知（2020年7月31日印发），由农业农村部食物与营养开展研究所主持承当《植物源性食品中甜菜碱的测定高效液相色谱法》的制定（工程编号：HYB-20143）,承担方法建立、方法验证及相关起草工作。

（二）主要起草单位农业农村部食物与营养开展研究所等。

（三）编写人员与分工表1.主要起草人员信息及任务分工

专业特长及分工

图1乙聘：水=50：50等度洗脱

由图1-4为不同浓度的洗脱程序，从出峰的时间，峰型对称性，响应程度等因素综合考虑，乙月青：水二80:20等度洗脱效果最正确，因此选取乙睛：水=80:20等度洗脱。

综上，实验确定最正确色谱条件如下：

色谱柱：Rx-SIL,5um,4.6X150mm；柱温：30℃；

流动相：A-乙月青；流动相B-水等度洗脱，洗脱程序如下:

表13.流动相等度洗脱程序

时间，min

流动相A,%

流动相B,%

流速mL/min

0

80

20

1.0

30

80

20

1.0

流速：1.0mL/min；

检测波长：196nm；

进样量：10uLo5、方法的科学性、可操作性的验证

5.1标准溶液线性范围

标准储藏溶液：准确称取甜菜碱标准品25.0mg,用超纯水溶解并定容至25mL即为10.0mg/mL的标准储藏液，于-18七下，贮存于密闭棕色玻璃瓶中，有效期为6个月。

标准中间溶液：吸取1.0mL标准储藏液于10mL棕色容量瓶中，用超纯水定容至10mL,制成标准中间液，现时现配。

标准曲线工作溶液：吸取适量标准中间溶液，用超纯水配制成质量浓度为0.01mg/mL、0.04mg/mL、0.08mg/mL、0.1mg/mL、0.4mg/mL、0.8mg/mL的标准曲线工作溶液。将标准系列工作液分别注入液相色谱中，测定相应的峰面积，以标准工作液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果见表14。

表14.甜菜碱标准曲线方程和浓度范围5.2方法的检出限与定量限

组分

回归方程

相关系数

浓度范围（mg/mL）

甜菜碱

y=2147.3x-1.6646

1.0

0.01067-0.8536

取样品按照实验建立方法处理，上机测定观察信噪比，适当进行稀释，检出限（LOD）和定量限（LOQ）分别以3和10倍的信噪比计算。当样品取样量为5.0g,定容体积为50mL时，甜菜碱的检出限为1.0mg/100g,定量限为3.0mg/100go5.3方法的精密度

选取含有甜菜碱的谷物、蔬菜、水果等代表性食品，以干枸杞、藜麦和菠菜为研究对象别进行精密度试验，平行测定6个样品，考察检测方法的精密度。

表15.精密度实验结果

甜菜碱

测定值(mg/100g)

平均值

1

2

3

4

5

6

(mg/100g)

RSD(%)

干枸杞

772.22

772.74

802.52

789.01

789.86

779.67

784.34

1.49

藜麦

881.65

857.45

824.99

869.95

853.38

853.38

858.59

2.24

菠菜

204.82

202.72

203.03

199.20

195.24

199.55

200.76

1.72

根据GB/T27404-2008《实验室质量控制规范食品理化检测》的要求，被测组分含量大于100mg/kg时，实验室内变异系数为3.8%。由表15可知，样品中的甜菜碱6次平行实验测定结果的相对标准偏差均小于3.8%,说明该方法的精密度良好，适合定量分析。

5.4方法的回收率选回收率公式如下：

P=储一儿X100in式中，P-加入的标准物质的回收率；m-加入的标准物质的量;

X「加标试样的测定值；X。-本底的测定值。

分别准确称取干枸杞、藜麦和菠菜样品，向样品本底添加低、中、高三个浓度水平的标准溶液，进行三水平六平行加标回收实验，计算甜菜碱的回收率和相对标准偏差。

表16.甜菜碱回收率实验结果(n=6)

样品

本值

(mg/100g)

加标量

(mg)

加标回收率％

RSD%

(n=6)

1

2

3

4

5

6

均值

1.00

103.65

98.57

101.68

9