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巢式RT-PCR与FISH联合：儿童ALL常见融合基因精准检测新策略

一、引言

1.1研究背景与意义

急性淋巴细胞白血病（ALL）是儿童时期最为常见的恶性肿瘤之一，严重威胁着儿童的生命健康和生活质量。据统计，ALL占儿童血液系统肿瘤的70%以上，其中又以B-细胞ALL最为常见。该疾病的发病机制极为复杂，而融合基因的出现被认为是导致癌症发展的关键因素之一。常见的ALL融合基因如TEL-AML1、E2A-PBX1、MLL-AF4等，在ALL的发生、发展过程中扮演着重要角色。这些融合基因的存在不仅影响白血病细胞的生物学特性，还与疾病的预后密切相关。

准确检测ALL患儿是否存在融合基因，对于疾病的诊断、预后评估及治疗方案的制定都具有不可估量的意义。在诊断方面，融合基因检测能够为疾病确诊提供更为精准的分子层面依据，有助于与其他血液疾病进行鉴别诊断，避免误诊和漏诊。在预后评估中，不同的融合基因类型往往预示着不同的疾病发展趋势和治疗反应，例如某些融合基因阳性的患儿可能具有更高的复发风险，而另一些则可能对特定治疗方案更为敏感，这为医生预测患儿的预后情况提供了关键信息。在治疗方案制定上，融合基因检测结果能够指导医生选择最适宜的治疗手段，实现精准治疗，提高治疗效果，减少不必要的治疗损伤和医疗资源浪费。

巢式逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）是检测融合基因的常用技术之一，它具有较高的灵敏度，能够检测出极低水平的已知融合基因转录本。然而，该技术的局限性在于仅能检测已知的融合基因，对于那些尚未被发现或报道的未知融合基因则无能为力。荧光原位杂交（FISH）是一种能够直接观察细胞中染色体结构与数量的分析技术，它尤其适用于检测染色体易位等结构变异，可用于未知融合基因的检测。通过将荧光标记的核酸探针与细胞内的染色体或DNA进行杂交，FISH能够直观地显示出染色体的异常变化，从而发现潜在的融合基因。

将巢式RT-PCR和FISH联合应用于ALL融合基因的检测，具有显著的优势。两者的结合能够实现优势互补，巢式RT-PCR负责检测已知融合基因，确保对常见融合基因的准确识别；FISH则专注于检测未知融合基因，填补了巢式RT-PCR在这方面的空白。这种联合检测方法能够提高对于ALL常见和未知融合基因的检测效率和准确性，为ALL的早期诊断、预后评估及治疗方案制定提供更全面、更可靠的支持，具有极高的临床应用价值。

1.2国内外研究现状

在国外，对于儿童ALL融合基因检测的研究开展较早，并且取得了丰硕的成果。多项大规模的临床研究对各种融合基因在儿童ALL中的发生率、临床特征及预后意义进行了深入探讨。例如，美国儿童肿瘤协作组（COG）的研究表明，TEL-AML1融合基因在儿童ALL中的阳性率约为20%-25%，并且该融合基因阳性的患儿通常具有较好的预后。同时，国外在融合基因检测技术的研发和应用方面也处于领先地位，不断有新的检测方法和技术涌现，如基于二代测序技术的融合基因检测平台，能够同时检测多种已知和未知的融合基因，大大提高了检测的通量和准确性。

在国内，随着医疗技术的不断进步和对儿童ALL研究的逐渐深入，对于融合基因检测的重视程度也日益提高。许多大型医院和科研机构开展了相关研究，对我国儿童ALL患者的融合基因谱进行了分析。研究发现，我国儿童ALL中常见融合基因的分布与国外报道存在一定的差异，这可能与种族、环境等因素有关。在检测技术方面，巢式RT-PCR和FISH等传统技术已广泛应用于临床实践，并且在一些研究中尝试将多种技术联合应用，以提高检测的准确性。例如，有研究将巢式RT-PCR、FISH和免疫分型技术相结合，对儿童ALL进行综合诊断，取得了较好的效果。

关于巢式RT-PCR和FISH联合应用检测儿童ALL融合基因的研究，国内外均有相关报道。这些研究一致表明，联合检测方法能够显著提高融合基因的检出率，为ALL的诊断和治疗提供更有力的支持。然而，目前的研究仍存在一些不足之处，如对于联合检测方法的最佳应用模式和流程尚未达成共识，不同研究之间的检测结果存在一定的差异，这可能与实验条件、样本选择等因素有关。此外，对于联合检测结果的临床解读和应用，还需要进一步的研究和探讨，以更好地指导临床实践。

1.3研究目的与创新点

本研究旨在深入探究巢式RT-PCR和FISH联合应用于儿童ALL常见融合基因检测的效果，具体包括以下几个方面：首先，通过对大量ALL患儿样本的检测，准确评估联合检测方法对常见融合基因TEL-AML1、E2A-PBX1、MLL-AF4等的检出率，与单一检测方法进行对比，明确联合检测的优势；其次，分析联合检