冷冻保存技术规范.docxVIP

ICS65.020.30CCSB43

NXSLX

宁夏饲料工业协会团体标准

T/NXSLX0211—2025

肉牛精液冷冻保存技术规范

TechnicalSpecificationforCryopreservationofCattleSemen

2025-11-7发布2025-12-7实施

宁夏饲料工业协会发布

I

T/NXSLX0211—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本文件由宁夏大学提出。

本文件由宁夏饲料工业协会归口。

本文件起草单位：宁夏大学、固原富民农业科技发展有限公司、西北农林科技大学。

本文件主要起草人：张令锴、王娜娜、魏大为、胡亚美、马云、金昊延、聂路玮、陶金忠、何学良、咸海龙、黄永震、刘佳妮、解雅茹。

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肉牛精液冷冻保存技术规范

1.范围

本文件规定了肉牛精液冷冻的术语和定义、要求、操作流程与技术要点、储存与运输、解冻、记录与档案管理以及安全注意事项。

本文件适用于有肉牛冷冻精液保存需求的场景。

2.规范性引用文件

下列文件中的内容通过文件中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4143

牛冷冻精液

GB/T31581

牛性控冷冻精液生产技术规程

GB14925

实验动物环境及设施

GB19489

实验室生物安全通用要求

NY/T815

肉牛饲养标准

《家畜人工授精技术规范》

3.术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1肉牛冷冻精液CattleFrozenSemen

指将采集的精液进行特定程序稀释、降温和冷冻后，在超低温（-196℃)下长期保存的肉牛种用精液。

4.基本要求

4.1场地要求

应具备独立的采精大厅、精液处理实验室（洁净区）、精液冷冻与储存区。实验室环境条件应符合GB14925中相关洁净度要求。

4.2人员要求

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操作人员应经过专业技术培训，熟练掌握精液冷冻保存的操作规程。

4.3设备要求

应配备假阴道、采精架等采精设备；恒温水浴槽、显微镜（带恒温台和相差功能）、电子天平、pH计、精子密度测定仪、血细胞计数板或计算机辅助精子分析系统（CASA）、高速离心机、精液细管灌装与封口机、程序性冷冻仪、液氮罐（储存罐和运输罐）（见附录表A表A.2）。

4.4生物安全

精液处理实验室应洁净、无尘，定期消毒。操作台面温度应维持在18℃-25℃。实验室生物安全管理应符合GB19489的规定。

5.操作流程与技术要点

5.1采精前的准备5.1.1种公牛管理

种公牛应健康状况良好，营养管理参照NY/T816的原则，有规律的运动和采精计划。采精前应对其外生殖器进行清洁。

5.1.2器械准备

所有接触精液的器械必须严格消毒，使用前用经灭菌的稀释液冲洗。假阴道内胆温度应保持在42℃±2℃。

5.2精液采集

采用假阴道法采集精液，操作应符合《家畜人工授精技术规范》要求。操作应温和、迅速，避免对种公牛造成应激和精液污染。

5.3精液保存

采集的精液应迅速置于37℃±1℃恒温水浴槽中，并在30分钟内进行品质检查。

5.4精液品质检查

5.4.1感官检查

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正常精液呈乳白色或淡黄色，略有腥味，无杂质。

5.4.2活力检查

取一滴精液在37℃±1℃预热的载玻片上，置于带有恒温台的显微镜下评估直线前进运动精子的百分比。原精活力低于70%者应废弃（见附录表B表B.1）。

5.4.3密度检查

使用精子密度仪或血细胞计数板进行测定。

5.4.4畸形率检查

使用精子计数板和计算机辅助精子分析系统（CASA），计算形态异常精子比例。畸形率超过15%的精液应废弃（见附录表B表B.1）。

5.5精液稀释

使用成分明确、质量稳定的自配冷冻稀释液，其主要成分应包括卵黄、甘油、糖类（如果糖、葡萄糖）及抗生素（见附录A表A.1）。根据精子密度和活力，确定最终稀释比例，保证每支细管解冻后的有效精子数符合GB/T31581的规定。

其稀释应遵循GB4143要求：稀释液温度必须与精液温度一致（37℃±1℃);先以不含甘油的基础液进行第一次稀释，缓慢降温至4-5℃后，再加入等温的含甘油稀释液进行第二次稀释（见附录表C表C.1）