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化学发光共振能量转移体系：原理、构建与肿瘤标志物检测应用

一、引言

1.1研究背景与意义

肿瘤严重威胁人类健康，全球范围内癌症发病率和死亡率居高不下。世界卫生组织国际癌症研究机构（IARC）发布的2020年全球癌症负担数据显示，当年全球新增癌症病例1929万例，癌症死亡病例996万例。早期诊断对肿瘤治疗至关重要，能显著提高患者生存率和生活质量。如早期乳腺癌患者5年生存率可达90%以上，而晚期患者5年生存率仅为20%左右。肿瘤标志物检测作为重要的早期诊断手段，可辅助医生及时发现肿瘤的存在与发展，为后续治疗争取宝贵时间。

肿瘤标志物是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞合成、释放或机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。它们存在于血液、尿液或体组织中，可用于帮助检测、诊断或监测癌症。常见肿瘤标志物如癌胚抗原（CEA）主要用于结直肠癌检测，也可用于乳腺癌、肺癌、胃癌等监测；甲胎蛋白（AFP）主要用于肝细胞癌和生殖细胞肿瘤的诊断与监控；前列腺特异性抗原（PSA）主要用于前列腺癌的筛查、诊断和疗效监控。肿瘤标志物检测在肿瘤普查、诊断、判断预后和转归，评价治疗疗效和高危人群随访观察等方面，都具有较大实用价值。

传统肿瘤标志物检测方法存在诸多局限性。如酶联免疫吸附测定（ELISA）灵敏度有限，难以检测到低浓度肿瘤标志物；放射免疫分析（RIA）存在放射性污染风险，对操作人员和环境安全构成威胁；荧光免疫分析易受背景荧光干扰，导致检测结果准确性降低。因此，开发高灵敏度、高选择性、操作简便的肿瘤标志物检测新方法具有重要的现实意义。

化学发光共振能量转移（CRET）体系作为一种新兴技术，可实现分子间非辐射跃迁，将一种荧光分子激发态能量直接传递给另一种荧光分子，进而观察另一种荧光分子的荧光信号。该方法能有效提高荧光信号强度，抑制背景干扰。在药物筛选、生物学研究以及分子诊断等领域，CRET体系展现出巨大应用潜力。将CRET体系应用于肿瘤标志物检测，有望突破传统检测方法的局限，为肿瘤早期诊断和治疗提供更精准、高效的技术支持。

1.2国内外研究现状

国外在化学发光共振能量转移体系研究和肿瘤标志物检测应用方面起步较早，取得了一系列重要成果。美国科研团队利用CRET技术构建了基于量子点和有机荧光染料的能量转移体系，实现了对肿瘤标志物前列腺特异性抗原（PSA）的高灵敏检测，检测限低至0.1pg/mL。该方法通过优化量子点和荧光染料的配对，提高了能量转移效率，显著增强了检测信号。德国学者研发了一种基于上转换纳米粒子的CRET体系，用于检测肿瘤标志物癌胚抗原（CEA）。上转换纳米粒子在近红外光激发下可发射出紫外-可见光，作为能量供体将能量转移给能量受体，实现了对CEA的特异性检测，线性范围为0.01-10ng/mL。这种方法利用近红外光激发，有效避免了生物样品的背景荧光干扰，提高了检测的准确性。

国内相关研究也在近年来迅速发展。中国科学院某研究所设计了一种基于核酸适配体和纳米金的CRET生物传感器，用于检测凝血酶这一肿瘤标志物的相关指标。该传感器通过将核酸适配体修饰在纳米金表面，利用适配体与凝血酶的特异性结合，引发CRET过程，实现了对凝血酶的高灵敏度检测，检测限达到1.0×10?12mol/L。华东地区某高校科研人员构建了基于碳量子点的CRET体系，用于肿瘤细胞内三磷酸腺苷（ATP）含量的检测。通过对碳量子点的表面修饰和能量转移条件的优化，实现了对肿瘤细胞内ATP含量的实时监测，为肿瘤的早期诊断和治疗效果评估提供了新的手段。

然而，目前国内外研究仍存在一些问题和挑战。部分CRET体系的稳定性和重复性有待提高，在实际应用中可能导致检测结果的偏差；能量转移效率的进一步提升也是研究的难点之一，如何优化能量供体和受体的选择及体系的构建，以实现更高效的能量转移，是未来研究需要重点解决的问题；此外，CRET体系在复杂生物样品中的应用还面临着干扰因素多、检测特异性有待增强等问题。

1.3研究内容与创新点

本研究围绕化学发光共振能量转移体系展开，深入探究其在肿瘤标志物检测中的应用。首先，系统研究化学发光共振能量转移体系的原理，包括能量转移的机制、影响能量转移效率的因素等。通过理论分析和实验验证，明确体系中能量供体和受体的相互作用方式，以及环境因素如温度、pH值等对能量转移过程的影响。

其次，探索化学发光共振能量转移体系的构建方法。尝试不同的能量供体和受体组合，如量子点与有机荧光染料、纳米粒子与荧光蛋白等，筛选出具有高效能量转移效率的组合。同时，研究体系的组装方式和条件优化，包括纳米材料的制备、表面修饰以及生物分子的固定化方法等，以提高体系的稳定性和重复性。

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