重组DNA技术的基本工具课件2021-2022学年高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第3章基因工程;对生活中的生物学现象进行分析并提出问题，体现了科学探究的核心素养。;1.概述基因工程是如何在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的

2.阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具;一、基因工程的概念及其诞生和发展;2．基因工程的诞生和发展

(1)1944年，艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是，还证明了DNA可以在。

(2)1953年，沃森和克里克建立了_____模型并提出了遗传物质自我复制的假说。

(3)1970年，科学家在细菌中发现了第一个(简称限制酶)。

(4)20世纪70年代初，多种限制酶、和逆转录酶被相继发现。这些发现为DNA的切割、连接以及功能基因的获得创造了条件。;(5)1972年，伯格首先在体外进行了DNA改造的研究，成功地构建了第

一个体外分子。

(6)1973年，科学家证明可以作为基因工程的载体，构建重组

DNA，导入受体细胞，使外源基因在细胞中成功表达，并实现

物种间的基因交流。至此，基因工程正式问世。

(7)1983年，科学家采用农杆菌转化法培育出世界上第一例转基

因。此后，基因工程进入了迅速发展的阶段。;1．为什么几乎所有生物的DNA分子都可以进行拼接？;【例1】以下说法叙述符合基因工程概念的是 ()

A．在细胞内将DNA进行重组，赋予生物新的遗传特性

B．将人的干扰素基因重组到质粒上后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株

C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株

D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后将其DNA整合到细菌DNA上;二、重组DNA技术的工具酶;(4)应用：已知限制酶EcoRⅠ和SmaⅠ识别的碱基序列和酶切位点分别为G↓AATTC和CCC↓GGG，在图中写出两种限制酶切割DNA后产生的末端并写出末端的种类。;2．DNA连接酶

(1)作用：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的。

(2)种类：;DNA连接酶和DNA聚合酶均能形成磷酸二酯键，二者的作用对象相同吗？为什么？;【归纳提升】

1．限制酶的识别序列和切割末端的判断;2．五种酶的比较;【例2】下列关于DNA连接酶的叙述错误的是 ()

①催化相同黏性末端的DNA片段之间的连接

②催化不同黏性末端的DNA片段之间的连接

③催化两个黏性末端互补碱基间氢键的形成

④催化DNA分子两条链的脱氧核糖与磷酸之间的磷酸二酯键的形成

A．①③B．②④C．②③D．①④;三、基因进入受体细胞的载体;(2)其他载体：、等。

2．功能

(1)相当于运输工具，将外源基因送入。

(2)携带在受体细胞内大量复制。;1．质粒作为目的基因的载体，其本质是什么？所有质粒都是载体吗？为什么？;3.质粒上氨苄青霉素抗性基因的作用是什么？;1．载体上标记基因的标记原理

载体上的标记基因一般是一些抗生素的抗性基因。目的基因要转入的受体细胞没有抵抗相关抗生素的能力。当含有抗生素抗性基因的载体进入受体细胞后，抗性基因在受体细胞内表达，使受体细胞能够抵抗相应的抗生素，所以在受体细胞的培养体系中加入该种抗生素就可以只保留转入载体的受体细胞。;【例3】质粒是基因工程中最常用的目的基因运载工具。下列有关叙述不正确的是()

A．质粒是不只存在于细菌细胞质中能自主复制的小型环状双链DNA分子

B．在所有的质粒上都能找到一个或多个限制酶切割位点

C．携带目的基因的重组质粒整合到宿主细胞的染色体DNA上会随后者的复制而复制

D．质粒上的抗性基因常作为标记基因供重组DNA的鉴定和选择;四、DNA的粗提取与鉴定;2．方法步骤

(1)称取约30g洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入10mL，充分研磨。

(2)在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在4℃冰箱中放置几分

钟后，再取。也可以直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min

的转速下离心5min，再取放入烧杯中。

(3)在上清液中加入的酒精溶液(体积分数为95%)，静置

2～3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿方

向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水