目的基因的筛选与获取和基因表达载体的构建课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptxVIP

第2节基因工程的基本操作程序

第1课时目的基因的筛选与获取

和基因表达载体的构建;导学聚焦;问题探讨

1997年，我国政府首次批准商业化种植转基因抗虫棉。到2015年，我国已育成转基因抗虫棉新品种100多个，减少农药用量40万吨，增收节支社会经济效益450亿元。;1.目的基因的筛选与获取;1.目的基因的筛选与获取

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2.基因表达载体的构建

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3.将目的基因导入受体细胞

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4.目的基因的检测与鉴定;一、目的基因的筛选和获取

1.目的基因：用于__________________或____________________的基因。

△根据不同的需要，目的基因不同，如：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。;一、目的基因的筛选和获取

2.筛选合适和目的基因

（1）较为有效的方法：从相关的_________和__________的基因中进行筛选。

认识基因结构和功能的技术方法：________技术、遗传序列数据库、_________工具。

（2）实例：在培育转基因抗虫棉之前，科学家不仅掌握了Bt基因的序列信息，也对Bt基因的表达产物____________有了较为深入的了解。;转基因抗虫棉的抗虫机制：

Bt抗虫蛋白的抗虫原理：当Bt抗虫蛋白被分解为多肽后，多肽与害虫肠上皮细胞的特异性受体结合，导致细胞膜穿孔，最后造成害虫死亡。

抗虫棉中的Bt抗虫蛋白会不会对人畜产生危害？

Bt抗虫蛋白只有在某类昆虫肠道的碱性环境中才能表现出毒性，而人和牲畜的胃液呈酸性，肠道细胞也没有特异性受体，因此，Bt抗虫蛋白不会对人畜产生上述影响。;3.利用PCR获取和扩增目的基因

（1）概念：PCR全称为_______________，是一项在生物_____复制____________的核酸合成技术。

通过这项技术可在短时间内大量扩增目的基因。

整个过程是在体外进行，故又叫做体外DNA扩增技术。

①全称：

②原理：

③操作环境：

④目的：

⑤优点：;（2）DNA体内复制的条件：;引物：

一小段能与DNA母链的一段碱基序列互补配对的短单链核酸。;PCR反应的过程

①变性;PCR反应的过程

②复性;PCR反应的过程

③延伸;（5）DNA体外复制（PCR）的条件;④重复循环多次

第一轮循环的产物作为_________反应的_______，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物。

第二轮循环的产物作为__________反应的_______，经过变性、复性和延伸三步产生第二轮循环的产物。

⑤结果：每次循环后目的基因的量增加一倍，即成_________形式扩增（约为2n）;练习：

关于PCR技术的说法不正确的是（）

A.PCR技术获取目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列

B.PCR过程共需要两个引物分子

C.PCR的主要过程包括变性、复性、延伸，其中延伸阶段需要耐高温的DNA聚合酶

D.PCR过程中DNA合成方向是5’到3’

E.PCR扩增中不需要解旋酶也能解开双链DNA;（6）PCR技术与生物体内DNA复制的比较;【知识小结】PCR技术

（1）过程

变性（超过90℃）——目的基因DNA___________后解聚为单链

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复性（50℃左右）——两种_____通过碱基互补配对与两条单链DNA结合

↓

延伸（72℃左右）——以单链DNA为模板，在_________________作用下

↓进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3端

重复以上循环;【知识小结】PCR技术

（2）条件：DNA模板、分别与两条模板链结合的2种__________、四种___________、______________________。

（3）结果：1个模板DNA分子经过n轮PCR，以_______方式扩增，可以扩增出______个DNA片段，共需要引物数量为________个。;（7）PCR的数量关系;（7）PCR的数量关系;（7）PCR的数量关系——第1次扩增;（7）PCR的数量关系——第2次扩增;（7）PCR的数量关系——第3次扩增;（7）PCR的数量关系;引物的设计：

①设计引物的依据是

_______________________________

②引物设计时既要考虑目的基因序列，又要考虑载体序列，原因是

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