实验高效液相色谱法年.pptVIP

实验高效液相色谱法年;[方法原理];1.仪器:

高效液相色谱仪,配备二极管阵列检测器;

超声波清洗仪;

50ml容量瓶;50ml烧杯;50μl微量进样器

;糖精钠标准储备溶液(10.0mg/ml):

准确称取于120℃烘干4h后的糖精钠(C6H4CONNaSO2·2H2O)0.5000g,加水溶解后定容至50ml

苯甲酸标准储备溶液(5.0mg/ml):

准确称取0.2500g,加碳酸氢钠溶液25ml,加热溶解,

定容至50ml

山梨酸标准储备溶液(5.0mg/ml):

准确称取0.2500g山梨酸,加碳酸氢钠溶液25ml,加热溶

解,定容至50ml

标准混合使用液

(含糖精钠1.0mg/ml,苯甲酸0.5mg/ml,山梨酸0.5mg/ml):准确吸取各标准储备溶液5.0ml,加水定容至50ml;2.配制标准系列:取9只50ml容量瓶分别编上号码,按下表配制标准系列。;;;1.样品处理:吸取10.00～20.00ml汽水,放入50ml烧

杯中,超声除去二氧化碳,用稀氨水调pH7.0,加水定

容至50ml,用滤膜(0.45μm)过滤,备用。;1.插好电极,打开电源开关,按模式键切换到pH测量状态

2.用两点法进行校正(b=2)(pH4.01,6.86,9.18)

3.按模式进入b=2

4.将电极浸入标准缓冲液中(pH=6.86),按“校正”,当到达

终点时显示屏上显示相应校正结果;将电极放入第二种

标准缓冲液(pH=4.01或9.18),按“校正”,当到达终点时

显示屏上显示相应校正结果;按“读数”,保存校正结果

并退回到正常的测量状态

5.将电极插入到被测液中,调节pH到所需值

;(1)过滤：0.45um或更小孔径滤膜

目的：除去溶剂中的微小颗粒，避免堵塞色谱柱，尤

其是使用无机盐配制的缓冲液。;3.测定;;[思考题];[注意事项];(2)脱气：

除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡

气泡对测定的影响：

1）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积

2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形

3）检测器中的气泡产生基线波动;1.吸气器法（流动相抽滤）

*可以抑制制做流动相时产生的气泡

*只是暂时的脱气法

*不能解决因溶解气体造成的问题

2.超声脱气法

3.使用氟树脂膜的减压脱气法

;★使用超声波震荡器，一般超声震荡15分钟左右

★注意流动相在超声震荡脱气过程中，温度会升

高，应待其降至室温后再上机使用。

★由于液体对气体的溶解作用，时间长??气体会

再溶入流动相中，应引起注意。;溶剂前处理-脱气;缓冲液的使用;第20页，共28页。;流动相的更换;液相色谱简易流程图;液相系统维护流程图;泵工作示意图;LC-20AT

串联式柱塞往复泵;单向阀;单向阀结构;谢谢大家！