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第十二章血痕检验第1页，共38页，星期日，2025年，2月5日血痕检验需要解决的问题送检检材是否是血痕。如果是血痕，是人血还是动物血。若是人血，则测定遗传标记进行个人识别同时进行其他诸如出血量、出血时间及出血部位推断等问题。第2页，共38页，星期日，2025年，2月5日四、DNA检验(一)根据Alu序列作种属鉴定哺乳类动物细胞DNA有一种中度重复序列，重复单位长约300bp。其中在170bp附近有限制性内切酶Alu切割的AGCT序列，命名为“Alu’家族。Alu序列为人和灵长类所特有，具有种属特异性。对血痕检材用PCR扩增Alu家族进行检测，可作为种属鉴定。第3页，共38页，星期日，2025年，2月5日引物序列：Alu9.15-GGCACTTTGGGAGGCCAAGG-3’Alu9.25-TACAAGCTTGTGCCACCATGCCCAAC-3’扩增产物在2％琼脂糖凝胶中电泳，可获得DNA长度为130bp的特异性条带。牛、大鼠、蛙、鲫鱼等的扩增片段大于130bp，且扩增产量非常少。除猴血外，其他动物均无扩增产物。第4页，共38页，星期日，2025年，2月5日(二)根据28SrRNA序列鉴定种属人类rRNA由60s和40s大小的两个亚基构成，其中60s又由28s、5.8s和5s三个亚基组成。大部分28srRNA编码序列的区域进化缓慢，相对保守，但保守区中的可变区进化较快，种属之间差异较大。针对这一区域进行PCR扩增，可获得人和动物有差异的特异性片段。引物A：5’一ATCTAGTAGCTGGTTCCCTC-3引物B：5-CCTCTAATCATTCGCTTTAC-3’经PCR扩增，电泳检测，人类DNA扩增片段为108、104、101及99bp，主要产物为99bp，不同动物PCR扩增产物长度不同。第5页，共38页，星期日，2025年，2月5日(三)细胞色素b基因序列进行种属鉴别细胞色素b基因位于mtDNA上，是一个具有种属差异的遗传标记，几乎所有的生物检材都可检验。由于mtDNA拷贝数远多于核DNA，检测的灵敏度较高。人和其他哺乳动物的细胞色素b基因片段均存在AluI酶切位点，但酶切片段大小不同，可区分人与其他哺乳动物。第6页，共38页，星期日，2025年，2月5日引物序列：引物1：5’一CATCGACCTTCCAGCCCCATCAAACAT-3’引物2：5~-TGTTCTACTGGTTGGCCTCCAATTCA-3’PCR扩增产物经琼脂糖凝胶检测，可见一条981bp长的DNA片段。扩增产物用两种限制酶切割(AluI、NcoI)，酶解产物用6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用银染色方法显现酶解片段。人类与动物酶切片段大小不同。第7页，共38页，星期日，2025年，2月5日第六节血痕的个人识别检材确定为人血后，应测定血痕中的遗传标记。选择原则：①良好的遗传多态性；②较稳定；③检测方法标准化、简单、结果重复性好。第8页，共38页，星期日，2025年，2月5日一、血痕的血型测定ABO血型抗原对高温、腐败有相当的耐受性，而且抗原性很强、稳定，可以在血痕中保存相当长时间。ABO血型物质不仅红细胞上有，其他人体组织细胞也存在ABO抗原，这些特征在法医物证检材的个体识别中具有重要实际意义。ABO血型是法医物证检验中个人识别的传统检测项目。第9页，共38页，星期日，2025年，2月5日(一)吸收试验吸收试验(absorptiontest)又称吸收一抑制试验(absorption-inhibitiontest)。第10页，共38页，星期日，2025年，2月5日原理：血痕中A、B、H血型物质能与相应的抗-A、抗-B、抗-H抗体发生特异性的结合，使抗血清中的游离抗体减少或消失，不能再与相应的A、B、O型指示红细胞发生凝集反应。若血痕中无某种ABH抗原，则不能抑制抗血清中的相应抗体，抗体与相应的指示红细胞会发生凝集反应，其反应的强度没有变化。根据抗血清在与血痕吸收反应前后的效价改变情况，可推断血痕所含的血型抗原种类，判断血痕的ABO血型。第11页，共38页，星期日，2025年，2月5日方法：取血痕3块，大小lcm~0.5cm，剪碎，置于试管中，分别加效价为16～32的抗-A、抗-B、抗-H血清各0.1ml。与检材充分混合后，置4℃冰箱吸收12～24h。离心取上清液测定吸收后的抗体效价。以检材无血痕部分作为阴性对照，用已知人A、B