第四章 基因工程（课件）高二生物下学期期中考点（浙科版2019）.pptxVIP

等风来等花开等相遇浙教版选修3生物技术与工程第四章基因工程

CONTENT第四章基因工程

CONTENT一、基因工程是在多个生物学分支的基础上发展而来1.基因工程：指有意识地把一个人们所需要的基因（目的基因）转入另一个生物体中，使后者获得新的遗传性状或表达所需要产物的技术。

在分子水平上对基因进行直接操控，打破常规育种难以突破的物种间的界限。

CONTENT1.限制性内切核酸酶（1）限制性内切核酸酶，简称“限制酶”，主要存在于细菌等微生物中。（2）它能破坏外源DNA，如侵染细菌的菌体DNA,“限制”病毒在细菌内的寄生，而细菌自身DNA经过相应的化学修饰则不会被限制酶破坏。限制酶的保护作用是细菌等进化出的一种防御机制。二、对DNA进行剪切、连接、复制是实现重组DNA技术的基础

CONTENT（3）限制性内切核酸酶能够识别双链DNA上特定的一小段核苷酸序列，并催化其中特定的两个核苷酸之间的磷酸二酯键水解，使得DNA双链在特定的位置断开。识别序列通常是4~8个核苷酸对，以6个核苷酸对最为常见。

(1)作用：能将DNA片段连接成一个重组DNA分子。微生物的DNA连接酶可以将不同来源的2个DNA分子的双链通过磷酸二酯键分别连接起来，形成一个稳定的重组DNA分子。2.DNA连接酶

（2）大肠杆菌中分离E.coliDNA连接酶仅能连接黏性末端，T4噬菌体中分离T4DNA连接酶可以连接黏性末端和平末端。

(1)外源DNA片段借助载体可在受体细胞内进行复制。多数外源DNA片段自身很难在受体细胞内成功复制，需要与含有复制起点的DNA分子相连才行，这种具备自主复制能力的DNA分子称为载体。它能与外源DNA相连接并将其送入受体细胞中进行扩增。3.载体

CONTENT①含有复制起点，能够独立自主复制并稳定存在;②含有一种或多种限制酶的识别序列，方便外源基因插入载体中;③具有筛选作用的标记基因，以便能够通过表型鉴别含有载体的细胞。（2）载体具有特征:

是独立于细菌拟核DNA之外的较小的环状DNA分子，是一种常用载体。大多数质粒的受体细胞是细菌，质粒在细菌内可以独立自主复制，具有多种限制酶识别序列，其携带的基因也会控制细菌的某些性状。载体也可以是动植物病毒、噬菌体。（3）质粒

CONTENT三、基因工程的一系列操作可使生物获得新的遗传性状基因工程的基本步骤：1.获取目的基因（1）化学合成法：将核苷酸按照特定顺序一个一个地连接起来合成目的基因。化学合成法需要已知目的基因全部序列，且成本较高，适于合成序列较短的基因。

CONTENT?①基因文库：把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体组合，导入受体细胞，形成克隆。②基因组文库：基因组中所有DNA序列克隆的总汇。③cDNA文库：特定的组织或细胞中提取并纯化全部mRNA，在逆转录酶等酶的催化下，以mRNA为模板合成互补的DNA，借助载体，利用基因组文库的方法形成。（2）借助载体建立基因文库

CONTENT在DNA聚合酶的作用下，在体外进行DNA大量扩增的一种分子生物学技术。（2）PCR技术

CONTENT（1）克隆载体：用于大量扩增外源DNA的载体。（2）表达载体：使目的基因既能扩增又能表达出相应蛋白质的载体。（3）表达载体包含适当的转录和翻译信号，例如，真核基因要在细菌中持续高水平地表达，质粒上除了复制起点、标记基因和多个限制酶的识别序列外，还需要加入细菌的启动子、终止子等。2.利用表达载体构建重组DNA分子

CONTENT（4）用同种限制性内切核酸酶剪切含有目的基因的DNA片段以及表达载体，然后用DNA连接酶将它们连接起来，可完成体外重组，形成重组的DNA分子。

CONTENT接受目的基因的细胞称为受体细胞。根据受体细胞类型可选择不同的基因导入方法。3.将目的基因导入受体细胞微生物细胞植物细胞动物细胞常用方法CaCl2溶液处理农杆菌转化法、电击法、基因枪法、花粉管通道法显微注射法受体细胞原核细胞、酵母菌等体细胞等受精卵

CONTENT（1）借助载体上的标记基因检测。（2）PCR技术检测：根据目的基因的序列设计PCR引物，利用待检DNA为模板进行PCR，再通过电泳或DNA测序技术鉴定PCR产物。核酸分子杂交是指两个不同来源核酸单链的核苷酸之间碱基互补配对的过程。4.检测目的基因及其表达产物

CONTENT核酸分子杂交利用核酸探针检测特异的核苷酸序列，核酸探针是带有放射性或荧光标记的具有特定核苷酸序列的DNA或RNA。利用探针检测目的基因的简要方法是:用化学方法使待检的DNA变性成单链并固定在硝酸纤维素膜上，然后加入探针，在适当的条件下探针与互补的目的基因片段形成双链。漂洗硝酸纤维素膜去除未互补结合的探针后，若硝酸纤维素膜仍具有放射性或荧光，则可