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硫酸铵沉淀实验记录表
一、实验基础信息栏
样品名称
样品来源
实验日期
目标物质
实验温度
溶液pH值
操作人
年月日
□0℃□4℃□室温□其他:
样品预处理
1.离心条件:______rpm×______min
2.上清液体积:______mL
3.初始饱和度:______%
4.缓冲液类型:________________
二、分级沉淀操作记录表
沉淀阶段
目标饱和度(%)
初始饱和度(%)
样品体积(mL)
硫酸铵添加量
搅拌时间
离心条件
沉淀状态
上清液处理
□固体:______g饱和液:______mL
rpm×min
□浑浊□絮状□颗粒□无沉淀
□弃去□继续盐析□保存
□固体:______g□饱和液:______mL
rpm×min
□浑浊□絮状□颗粒□无沉淀
□弃去□继续盐析□保存
□固体:______g□饱和液:______mL
rpm×min
□浑浊□絮状□颗粒□无沉淀
□弃去□继续盐析□保存
□固体:______g□饱和液:______mL
rpm×min
□浑浊□絮状□颗粒□无沉淀
□弃去□继续盐析□保存
□固体:______g:______mL
rpm×min
□浑浊□絮状□颗粒□无沉淀
□弃去□继续盐析□保存
三、沉淀后处理及分析表
沉淀编号
对应饱和度区间(%)
溶解缓冲液
溶解体积(mL)
透析条件
总蛋白量(mg)
目标活性(U)
比活性(U/mg)
收率(%)
1
缓冲液:时间:h
2
缓冲液:时间:h
3
缓冲液::h
4
缓冲液:____________h
5
缓冲液:时间:h
四、关键计算与操作规范
硫酸铵添加量计算
固体添加(室温):参考表2-1,根据初始与目标饱和度查表获取每升添加量,按实际体积换算。
饱和液添加:公式:V=V?×(S?-S?)/(1-S?)(V:饱和液体积;V?:原溶液体积;S?/S?:初始/目标饱和度)。
操作核心准则
盐添加:缓慢分批加入,轻柔搅拌避免起泡(防止蛋白变性);
温度控制:全程低温操作(0-4℃),减少蛋白降解;
离心时机:加盐后搅拌5-30min待沉淀稳定后离心;
饱和液配制:767g硫酸铵溶于1L水,调pH至7.0,50-60℃溶解后平衡。
五、实验总结与备注
目标物质最佳沉淀区间:%-%饱和度
主要杂质沉淀区间:%-%饱和度
异常情况记录:________________________(如沉淀量异常、活性丢失等)
后续纯化建议:□离子交换□凝胶过滤□亲和层析□其他:________
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