Gateway克隆系统的植物表达载体及构建方法和应用[发明专利].pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN110904137A

(43)申请公布日

2020.03.24

(21)申请号201911062021.5A01H5/12(2018.01)

A01H6/82(2018.01)

(22)申请日2019.11.01

(71)申请人西北农林科技大学

地址712100陕西省咸阳市杨凌示范区邰

城路3号

(72)发明人管清美牛春东曹富国施焕然

陈鹏翔

(74)专利代理机构西安长和专利代理有限公司

61227

代理人何畏

(51)Int.Cl.

C12N15/66(2006.01)

C12Q1/6876(2018.01)

C12N15/11(2006.01)

C12N15/82(2006.01)权利要求书2页说明书7页

序列表14页附图10页

(54)发明名称

Gateway克隆系统的植物表达载体及构建方

法和应用

(57)摘要

本发明属于生物技术和植物基因工程技术

领域，公开了一种Gateway克隆系统的植物表达

载体及构建方法和应用，所述Gateway克隆系统

的植物表达载体分别为PKGMYC，PKNYFP和

PKCYFP；PKGMYC的序列为SEQ

ID

NO：1；PKNYFP的

序列为SEQ

ID

NO：2；PKCYFP的序列为SEQ

ID

NO：3。本发明以pK7GWIWG2D(II),0或pK2GW7为骨

架，这两个载体分别使用SacI/KpnI和SacI/PmeI

核酸内切酶进行双酶切；通过同源重组技术将其

他Gateway系列载体构建入这两个载体，形成以

卡那霉素为筛选标记的植物表达载体；同时，

ApK7GWIWG2D(II),0为骨架的改造载体还具有非

7融合的GFP荧光蛋白筛选标记。

3

1

4

0

9

0

1

1

N

C

CN110904137A权利要求书1/2页

1.一种Gateway克隆系统的植物表达载体的构建方法，其特征在于，所述Gateway克隆

系统的植物表达载体的构建方法以pK7GWIWG2D(II)或pK2GW7为骨架，两个载体分别使用

SacI/KpnI和SacI/PmeI核酸内切酶进行双酶切；通过同源重组技术将其他Gateway系列载

体构建入两个载体。

2.如权利要求1所述的Gateway克隆系统的植物表达载体的构建方法，其特征在于，所

述Gateway克隆系统的植物表达载体的构建方法包括：

Gateway克隆系统的植物表达载体PKGMYC的构建方法将pEarleyGate203的35s-myc-

attR1-ccdb-attR2-OCS

terminal片段置换pK7GWIWG2D(II)部分片段形成PKGMYC；

Gateway克隆系统的植物表达载体pKCYFP和pKNYFP载体的构建方法包括：将

pEarleyGate101的35s-attR1-ccdb-attR2-YFP-HA-OCS

terminal或pEarleyGate104的

35s-YFP-attR1-ccdb-attR2-OCS

terminal片段置换pK2GW7的部分片段，分别形成PKCYFP