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基于miR-132-3p调控的芝麻酚在改善氟化物诱导小鼠认知障碍的机制研究与新型保健产品开发

摘要

氟化物污染在环境中广泛存在，长期摄入过量氟化物会导致小鼠认知障碍等健康问题。本研究聚焦于芝麻酚在改善氟化物诱导小鼠认知障碍中的作用，深入探讨其基于miR-132-3p调控的作用机制，并在此基础上进行新型保健产品的开发。通过实验研究发现芝麻酚可通过调控miR-132-3p改善小鼠认知功能，为新型保健产品的研发提供了理论依据。

关键词

芝麻酚；miR-132-3p；氟化物；认知障碍；保健产品开发

一、引言

1.1氟化物与认知障碍

氟化物是自然界中广泛存在的一种元素，在工业生产、饮用水消毒等过程中被大量使用。然而，过量的氟化物摄入会对生物体产生不良影响。大量研究表明，长期暴露于高氟环境会导致氟中毒，不仅影响骨骼和牙齿健康，还会对神经系统造成损害，引起认知障碍等问题。在小鼠实验中，氟化物会干扰神经递质的合成、释放和代谢，破坏神经细胞的结构和功能，进而影响学习和记忆能力。

1.2芝麻酚的潜在作用

芝麻酚是从芝麻中提取的一种天然酚类化合物，具有抗氧化、抗炎、神经保护等多种生物学活性。已有研究发现芝麻酚能够通过调节氧化应激反应、抑制炎症信号通路等方式保护神经细胞。但其在改善氟化物诱导的认知障碍方面的作用及机制尚未完全明确。

1.3miR-132-3p的研究背景

微小RNA（miRNA）是一类长度较短的非编码RNA，在基因表达调控中发挥重要作用。miR-132-3p参与了神经发育、突触可塑性和学习记忆等多个神经生物学过程。研究表明，miR-132-3p的表达异常与多种神经系统疾病相关。因此，探讨芝麻酚是否通过调控miR-132-3p来改善氟化物诱导的认知障碍具有重要意义。

1.4新型保健产品开发的意义

随着人们对健康的关注度不断提高，开发能够预防和改善认知障碍的保健产品具有广阔的市场前景。基于芝麻酚和miR-132-3p调控机制的研究成果，开发新型保健产品，不仅可以为消费者提供有效的健康解决方案，还能促进天然产物在保健品领域的应用。

二、材料与方法

2.1实验动物

选用健康雄性C57BL/6小鼠，体重20-25g，购自[动物供应商名称]。将小鼠饲养在温度（22±2）℃、湿度（50±5）%的环境中，给予标准饲料和自由饮水，适应性饲养1周后进行实验。

2.2主要试剂与仪器

芝麻酚（纯度≥98%）购自[试剂供应商名称]；氟化钠（分析纯）购自[试剂供应商名称]；miR-132-3p模拟物、抑制剂及阴性对照购自[生物公司名称]；RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购自[生物公司名称]；westernblot相关试剂购自[生物公司名称]；Morris水迷宫实验设备购自[仪器供应商名称]。

2.3实验分组与处理

将小鼠随机分为4组，每组10只：

1.对照组：正常饲养，自由饮用去离子水。

2.氟化物模型组：饮用含100mg/L氟化钠的去离子水，持续8周。

3.芝麻酚治疗组：饮用含100mg/L氟化钠的去离子水，同时每天灌胃给予芝麻酚（50mg/kg），持续8周。

4.miR-132-3p干预组：在芝麻酚治疗组的基础上，于实验第4周开始通过尾静脉注射miR-132-3p抑制剂或模拟物。

2.4行为学检测

在实验第8周结束后，采用Morris水迷宫实验检测小鼠的学习和记忆能力。将小鼠放入直径为120cm、高50cm的圆形水池中，水池中加入适量的水，水温保持在（22±1）℃，在水池中放置一个直径为10cm的平台，使其隐藏在水面下1cm处。实验分为定位航行实验和空间探索实验两个阶段。定位航行实验连续进行5天，每天将小鼠从不同的入水点放入水池中，记录小鼠找到平台的潜伏期。空间探索实验在定位航行实验结束后的第6天进行，移除平台，将小鼠从原平台的对角入水点放入水池中，记录小鼠在原平台所在象限的停留时间和穿越原平台位置的次数。

2.5分子生物学检测

2.5.1RNA提取与荧光定量PCR

实验结束后，处死小鼠，迅速取出海马组织，按照RNA提取试剂盒说明书提取总RNA。使用反转录试剂盒将RNA反转录为cDNA，然后采用荧光定量PCR试剂盒检测miR-132-3p的表达水平。以U6作为内参，采用2-ΔΔCt法计算miR-132-3p的相对表达量。

2.5.2Westernblot检测

提取海马组织中的总蛋白，采用BCA法测定蛋白浓度。取适量蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，然后将蛋白转移至PVDF膜上。用5%脱脂牛奶封闭膜1h，加入一抗（如BDNF、Synaptophysin等），4℃孵育过夜。次日，用TBS