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细胞采血与回输标准操作流程(CIK技术)

前言

细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）疗法作为一种重要的过继性免疫治疗手段，在临床应用中展现出独特的优势。其核心流程包括外周血单个核细胞（PBMC）的采集、体外诱导培养与扩增，以及最终的细胞回输。其中，规范、安全的采血与回输操作是确保治疗效果与患者安全的关键环节。本流程旨在为CIK技术的临床应用提供标准化的操作指引，确保每一步骤都符合生物安全与质量控制要求。

一、操作前准备

1.1人员准备

*资质要求：操作人员需经过严格培训，熟悉CIK治疗的基本原理、采血与回输的操作规程、潜在风险及应急处理措施，具备相应的执业资格。

*无菌观念：操作人员需深刻理解无菌操作的重要性，严格执行手卫生规范，包括洗手、戴口罩、帽子、无菌手套及穿无菌手术衣。

1.2环境准备

*采血环境：应在符合洁净要求的治疗室或专用采血室进行，操作前对环境进行清洁消毒，确保空气流通。

*回输环境：通常在病房或治疗室进行，环境需整洁，必要时进行空气消毒，减少人员走动。

1.3物品与试剂准备

*采血物品：

*无菌采血袋（含抗凝剂，如ACD-A或肝素，根据实验室标准选择）。

*一次性无菌采血针、止血带、碘伏或酒精消毒棉球、无菌纱布、胶带。

*标本管（如需同时送检其他项目）、标签、记号笔。

*血压计、听诊器、轮椅（必要时）。

*急救药品及设备（如肾上腺素、抗过敏药物、吸氧装置等）。

*回输物品：

*一次性输血器或专用细胞回输器（含滤网）。

*生理盐水、碘伏或酒精消毒棉球、无菌纱布、胶带。

*输液泵（根据情况选择使用）。

*急救药品及设备（同采血准备）。

*试剂检查：所有一次性耗材需在有效期内，包装完好无破损。回输用CIK细胞制剂需在规定时间内送达，检查其外观、标签信息（患者姓名、编号、细胞数量、活性、培养日期、回输日期、无菌检测结果等）是否符合要求，确认无误后方可使用。

1.4患者评估与准备

*采血前评估：

*详细询问患者病史、过敏史，特别是对血液制品或抗凝剂的过敏史。

*进行体格检查，重点关注生命体征及外周静脉条件。

*确认患者已签署知情同意书，了解治疗流程及可能的风险。

*告知患者采血前注意事项，如清淡饮食、避免过度劳累、保持良好休息。

*回输前评估：

*复测患者生命体征，评估一般状况。

*确认患者近期有无感染、发热、严重出血或其他不适宜回输的情况。

*向患者解释回输过程，缓解其紧张情绪，取得配合。

二、外周血单个核细胞（PBMC）采集流程

2.1核对与标识

*采血前，再次核对患者信息（姓名、性别、年龄、病历号等），确保与治疗计划一致。

*在采血袋及相关标本管上清晰、准确地标记患者信息、采血日期和时间。

2.2静脉穿刺与采血

*协助患者取舒适体位，选择粗直、弹性好、远离关节的外周静脉（通常为肘前静脉）。

*在穿刺点上方约数厘米处扎止血带，常规皮肤消毒（以穿刺点为中心，由内向外螺旋式消毒，范围应足够大），待干。

*操作者戴无菌手套，进行静脉穿刺，见回血后确认针头在血管内，固定针头。

*松开止血带，开始采血。根据治疗方案要求采集相应体积的外周血。采血过程中密切观察患者反应及采血袋充盈情况。

*如需多个采血袋，或需更换采血管，应注意操作的连续性与无菌性。

2.3采血结束与压迫止血

*采血达到预期体积后，先拔出针头，立即用无菌纱布或棉球在穿刺点上方沿血管走向纵向压迫止血，嘱患者或协助其保持按压姿势数分钟，直至无出血。

*检查穿刺点有无渗血、血肿，必要时用弹性绷带加压包扎。

*协助患者整理衣物，告知其采血后注意事项，如保持穿刺点清洁干燥，避免剧烈运动，适当休息，多饮水等。

2.4样本转运与交接

*采血袋轻柔混匀，避免剧烈震荡。

*将采集好的血液标本放入适当的转运箱，保持适宜温度（通常为室温或冷藏，根据实验室要求）。

*填写标本交接单，与实验室人员进行严格交接，双方签字确认。

三、CIK细胞培养与质量控制（简述）

*实验室接收血液标本后，在生物安全柜内进行PBMC的分离、纯化。

*加入特定的细胞因子进行体外诱导培养，定期观察细胞生长状况，调整培养体系。

*培养至预定时间，收获CIK细胞，进行洗涤、浓缩。

*质量控制：严格按照标准操作进行细胞计数、活性检测、表型分析、无菌检测、内毒素检测等。只有所有质量指标均合格的CIK细胞制剂方可用于回输。

四、CIK细胞回输流程

4.1回输前准备与核对

*双人核对：由两名医护人员共同核对患者信息（姓名、性别、年龄、病历号）与CIK细胞制