核酸的变性复性和分子杂交张昱21课件讲解.pptxVIP

核酸的变性、复性和分子杂交主讲人：张昱TheTertiaryStructure?ofDNA

分子考古助力文明探源02分子考古学是利用分子生物学技术，对出土的古生物进行分子水平上的考古研究，其核心是古DNA研究。古ＤＮＡ能够准确地反映生物的结构特征以及生物种群的系统发生与演变规律，为中华文明多元一体格局的形成和发展提供了科学依据。来源：中国考古网

目录CONTENTS一、核酸的变性三、分子杂交二、核酸的复性

教学目标06知识目标素质目标能力目标了解分子杂交；熟悉DNA变性和复性的应用；掌握DNA变性和复性的概念、观察判别的方法。通过分子考古学的引入，初步认识分子探针的原理；能识别DNA变性和复性的影响因素。培养从变量-定量中寻求条件适宜实验的理念；构筑理实一体化的概念。04

一、核酸的变性

1.核酸的变性06核酸变性是指双螺旋区氢键由于受热、或其他物理化学等因素影响发生断裂，空间结构破坏，形成单链无规则线团的过程。变性只涉及次级键的变化，不涉及共价键断裂。

1.核酸的变性07DNA变性常伴随其溶液的物理性质变化，包括浮力密度增加、黏度下降、偏振光旋转能力的改变以及紫外吸光度的变化。RNA本身只有局部的双螺旋区，其变性行为所引起的性质变化没有DNA明显。

1.核酸的变性08DNA变性后，碱基外露，紫外吸收增强，称为增色效应，可用于跟踪观察DNA的变性过程；在热变性实验中发现，多聚核苷酸的吸光度先缓慢变化，而后迅速达到最高峰值，DNA的变性特点是爆发式的，类似于结晶的溶解。变性温度范围中点值对应的温度称为变性温度Tm。

1.核酸的变性09由于胞嘧啶和鸟嘌呤之间存在____个氢键，其稳定性比胸腺嘧啶-腺嘌呤组成的碱基对更______，双螺旋中胞嘧啶-鸟嘌呤碱基对的含量越高，Tm越_____。

二、核酸的复性

112.核酸的复性适当处理（如缓慢冷却）能使变性分离后的互补DNA单链能够重新组成双链，该过程称为复性（也称为退火）。如果变性不完全，双链间有以小部分碱基仍通过氢键相连，复性可迅速发生。如果互补链完全分离，仍然可以复性，只不过这个过程会较慢。

122.核酸的复性由于单链是随机碰撞，一旦碱基配对正确，整个DNA分子的双螺旋就可以重组；核酸复性时，温度不宜过低（为了增加碰撞几率），低于Tm20~25℃是较合适的复性温度；复性后，碱基重新发生层叠，紫外吸收比变性状态减小，称为减色效应。

三、分子杂交

143.分子杂交不同来源的DNA分子放在一起加热使其变性，然后慢慢冷却，让其复性。若这些异源DNA之间有互补的序列或部分互补的序列，则复性时会形成“杂交分子”。

153.分子杂交将已知基因的DNA制成具有同位素、荧光发色团或生物素标记的DNA片段是DNA探针，可以用于检测未知的DNA分子，快速诊断癌症和遗传病。

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